【摘 要】
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目的 对微小隐孢子虫Ⅰ型跨膜蛋白Cgd7_1430进行亚细胞定位,研究其对HCT-8细胞的黏附特性及肝素结合特性,为深入研究微小隐孢子虫的侵入机制提供依据. 方法 对Cgd7_1430序列
【机 构】
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吉林大学人兽共患病研究所,人兽共患病研究教育部重点实验室,吉林长春130062;山东省医学科学院,山东省寄生虫病防治研究所
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目的 对微小隐孢子虫Ⅰ型跨膜蛋白Cgd7_1430进行亚细胞定位,研究其对HCT-8细胞的黏附特性及肝素结合特性,为深入研究微小隐孢子虫的侵入机制提供依据. 方法 对Cgd7_1430序列进行生物信息学分析,合成特异性多肽并制备抗多肽抗体,通过间接免疫荧光对该蛋白质在子孢子进行亚细胞定位;通过PCR扩增Cgd7_1430全长基因并克隆至PGEX-4T-1载体,用大肠埃希菌BL21 (DE3)菌株表达重组蛋白;通过细胞亲和ELISA和流式细胞术确定重组蛋白与HCT-8细胞的黏附特性;通过Pull-down确定重组蛋白的肝素结合特性. 结果 成功获得抗Cgd7_1430多肽抗体及其重组蛋白质,间接免疫荧光表明该蛋白定位于子孢子表膜,ELISA、流式细胞术表明该重组蛋白能够与HCT-8细胞结合,并呈现剂量依赖性和可饱和性,Pull-down实验表明重组蛋白能够与肝素结合. 结论 Cgd7_1430蛋白质是一种子孢子表膜蛋白,能够与HCT-8细胞特异性结合,该蛋白为肝素结合蛋白,可能与宿主细胞表面的硫化肝素受体结合介导虫体的侵入过程.本研究为深入研究隐孢子虫的侵入机制提供依据.
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