【摘 要】
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目的:研究hsa_circ_ 0005221通过miR-339-5p/STAT5A通路调控前列腺癌的进展的分子机制.方法:核质分离检测hsa_circ_0005221和miR-339-5p在细胞中的表达定位;Pulldown检测hsa_
【机 构】
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东南大学医学院,江苏南京211189;南京医科大学附属无锡第二人民医院泌尿外科,江苏无锡214002;东南大学附属中大医院泌尿外科,江苏南京210009;江苏省中医院溧阳分院泌尿外科,江苏常州2133
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目的:研究hsa_circ_ 0005221通过miR-339-5p/STAT5A通路调控前列腺癌的进展的分子机制.方法:核质分离检测hsa_circ_0005221和miR-339-5p在细胞中的表达定位;Pulldown检测hsa_circ_0005221结合的miRNA;软件预测结合荧光素酶报告基因确定与hsa_circ_0005221结合的RNA是miR-339-5p;定量PCR检测hsa_circ_0005221在前列腺上皮细胞和前列腺癌细胞的表达量;在前列腺癌细胞分别转染hsa_ circ__ 0005221过表达质粒和siRNA测DU145和LNCaP增殖、侵袭和迁移能力及上皮间质转化(EMT)和凋亡水平;在敲低hsa_circ_ 0005221基础上,转染miR-339-5P mimics和inhibitor测DU145和LNCaP增殖、侵袭和迁移能力及EMT标志性蛋白、STAT5A和凋亡水平.结果:hsa_circ_ 0005221在前列腺癌细胞的表达水平明显高于前列腺上皮细胞.核质分离实验表明hsa_circ_0005221、miR-339-5P均主要在胞质中表达.在DU145和LNCaP敲低hsa_circ_ 0005221,其增殖、侵袭、迁移及EMT能力明显下降;凋亡水平增加.过表达hsa_ circ_ 0005221则结果相反.在软件预测排名前5的miRNA中,Pulldown实验结果显示与hsa_circ_0005221结合的有miR-339-5P、miR-17、miR-520H;敲低或过表达hsa_circ_0005221,miR-339-5P变化最明显.荧光素酶报告基因结果显示hsa_circ_0005221与miR-339-5P结合.在DU145和LNCaP敲低hsa_circ_ 0005221基础上转染miR-339-5P mimics,其增殖、侵袭和迁移能力明显下降,凋亡水平增加,E-cad水平增加,N-cad水平下降,STAT5A表达水平增加.敲低hsa_circ_0005221基础上上转染miR-339-5P mimics则结果相反.结论:hsa_circ_ 0005221通过miR-339-5p/STAT5A通路促进前列腺癌的进展.
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