论文部分内容阅读
目的克隆并原核表达产单核细胞李斯特菌plcB基因。方法利用PCR技术从产单核细胞李斯特菌基因组中扩增不含编码信号肽的plcB基因。采用T—A克隆构建pGEM-T-plcB重组质粒，BamHⅠ、XhoⅠ双酶切pGEM-T—plcB获得plcB片段后再插入pGEX-6p-1原核表达载体，获得pGEX-6p-l-plcB重组表达质粒并在表达宿主菌BL21中诱导表达。对表达产物进行纯化和SDS-PAGE、Western-blotting、磷脂酶活性实验分析。结果克隆的plcB基因长834bp，与GenBank上公