【摘 要】
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目的探讨Ad-HGF转染大鼠脑膜间皮细胞(RMMCs)得到的细胞培养上清液促脑血管新生的分子调控及相关作用。方法无菌条件下取出生1~2 d SD大鼠的脑组织,采用机械吹打、轻消化法结
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目的探讨Ad-HGF转染大鼠脑膜间皮细胞(RMMCs)得到的细胞培养上清液促脑血管新生的分子调控及相关作用。方法无菌条件下取出生1~2 d SD大鼠的脑组织,采用机械吹打、轻消化法结合组织块培养法原代培养大鼠脑动脉内皮细胞,传3代后,通过倒置相差显微镜观察细胞形态,普通光学显微镜观察细胞HE染色、第Ⅷ因子相关抗原、细胞免疫荧光染色等三方面进行细胞鉴定;通过MTT法检测Ad-HGF感染LMC培养上清液对细胞增殖能力的影响;通过Transwells法检测对细胞迁移能力的影响;通过免疫印迹(WB)法检测CAEC中TGF-β1蛋白表达情况。结果 Transwells细胞迁移实验见PVPE膜上大量被结晶紫染色的CAEC;随机选取100倍视野下细胞迁移的数量进行比较,实验组与对照组有显著性差异(P<0.05);MTT法发现,实验组与对照组也有显著性差异(P<0.05);同一时间点,随着Ad-HGF感染LMC培养上清液及外源性HGF浓度增加,CAEC中TGF-β1平均光密度值逐渐降低,TGF-β1平均光密度值呈一定量相关性,差异有显著性(P<0.05)。结论采用机械吹打、胰酶消化法结合组织块培养法可以成功获取高纯度大鼠CAEC;Ad-HGF感染LMC培养上清液具有促进大鼠CAEC增殖和迁移的作用;Ad-HGF感染LMC培养上清液及HGF具有抑制CAEC中TGF-β1蛋白表达的作用。
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