早期放射性肺损伤小鼠中HMGB1表达及作用研究

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目的观察C57BL/6小鼠一次性大剂量(15Gy)胸部照射后肺组织高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein,HMGB1)表达和支气管肺泡灌洗液(bron choalveolar lavage fiuid,BALF)中HMGB1水平的改变,探讨HMGB1在小鼠放射性肺损伤中的表达及作用。方法 42只C57BL/6小鼠随机分为对照组(6只)、照射12h组(12只)、照射1周组(12只)和照射4周组(12只),ELEKTA直线加速器一次性15Gy照射小鼠胸部,建立放射性肺损伤模型。在相应的时间点获取BALF并处死照射后及对照组小鼠,保存肺组织标本。采用实时qRT-PCR检测肺组织HMGB1mRNA水平,采用蛋白质印迹法和免疫组化染色分析肺组织HMGB1蛋白水平。BALF中HMGB1、IL-17A、TNF-α和IL-6含量采用ELISA法检测,HE染色后光镜下观察肺组织病理形态变化。结果 HE染色显示,照射1周后肺泡腔内和细支气管壁可见成堆炎细胞浸润,毛细血管充血,肺间质水肿。照射4周后更为明显。HMGB1免疫组化染色显示,照射后肺组织细胞HMGB1表达明显增强。蛋白质印迹结果显示,对照组HMGB1蛋白表达量为0.42±0.10,照射12h组为0.78±0.13,照射1周组为1.23±0.21,照射4周组为1.56±0.22。照射后12h肺组织HMGB1蛋白表达量较对照组明显增高,F=11.809,P=0.035;并随时间延长而进一步升高,P<0.05。RT-PCR结果显示,对照组肺组织HMGB1mRNA相对表达水平(ΔCt)为9.69±1.40,照射12h组为7.58±1.01,照射1周组为5.45±1.06,照射4周组为3.55±0.73。照射12h组ΔCt显著性低于对照组,F=13.410,P=0.034;并随照射后时间延长肺组织HMGB1mRNA的ΔCt值进一步降低,P<0.05。ELISA结果显示,小鼠肺照射后各时间点BALF中HMGB1、IL-17A、TNF-α和IL-6水平均明显升高,P<0.01。结论小鼠肺照射后HMGB1表达改变,且存在时间依赖性;HMGB1参与放射性肺损伤过程。
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