【摘 要】
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目的应用酵母双杂交系统筛选人血管内皮生长因子受体Flt-1胞外最小配体结合域.方法采用PCR技术,从人胎盘cDNA文库扩增出4个截短的Flt-1 cDNA,分别含胞外第2、1-2、2-3和1-3个
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目的应用酵母双杂交系统筛选人血管内皮生长因子受体Flt-1胞外最小配体结合域.方法采用PCR技术,从人胎盘cDNA文库扩增出4个截短的Flt-1 cDNA,分别含胞外第2、1-2、2-3和1-3个loop,构建酵母双杂交系统融合表达质粒,并将pGBT9/hVEGF165与pGAD424/Flt-ls两两配对转化酵母菌SFY526.采用滤纸法和液体培养法对阳性克隆进行β-半乳糖苷酶活性分析.结果Flt-1胞外loop2-3与loop1-3的配体结合能力相差不大,loop1-2的结合力较弱,单独第2个loop无配体结合能力.结论利用酵母双杂交系统,筛选出了Flt-1胞外最小配体结合域-2-3loop,这对研制分子量更小、安全性更高的可溶性Flt-1片段,开发其在肿瘤、糖尿病性视网膜病变等血管生成相关疾病基因治疗中的应用具有重要的指导意义.
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