【摘 要】
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目的 探讨p53诱导型核蛋白2(TP53INP2)对乳腺癌细胞侵袭转移的影响.方法 采用Transwell小室筛选出癌侵袭性(MDA-MB-231-M)和非侵袭性(MDA-MB-231-NM)乳腺癌细胞;采用脂质体转染技术将pCMV6-TP53INP2过表达重组载体质粒转染至MDA-MB-231-NM细胞中,归为OE-TP53INP2组;将pRS-sh-TP53INP2干扰载体质粒转染至MDA-MB-231-M细胞中,以此降低TP53INP2,归为sh-TP53INP2组.OE-TP53INP2组细胞中分
【机 构】
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401331,重庆医药高等专科学校临床医学院
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目的 探讨p53诱导型核蛋白2(TP53INP2)对乳腺癌细胞侵袭转移的影响.方法 采用Transwell小室筛选出癌侵袭性(MDA-MB-231-M)和非侵袭性(MDA-MB-231-NM)乳腺癌细胞;采用脂质体转染技术将pCMV6-TP53INP2过表达重组载体质粒转染至MDA-MB-231-NM细胞中,归为OE-TP53INP2组;将pRS-sh-TP53INP2干扰载体质粒转染至MDA-MB-231-M细胞中,以此降低TP53INP2,归为sh-TP53INP2组.OE-TP53INP2组细胞中分别转染β-catenin干扰质粒、加入Wnt/β-catenin信号通路抑制剂(XAV-939),归为OE-TP53INP2+si-β-catenin组、OE-TP53INP2?+?XAV-939组.荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MDA-MB-231-NM和MDA-MB-231-M细胞中TP53INP2的表达,Transwell小室法检测MDA-MB-231-NM和MDA-MB-231-M细胞迁移和侵袭,TOPflash/FOPflash实验检测Wnt/β-catenin信号通路的活性,Western blot检测肿瘤蛋白TP53INP2和β-连环蛋白(β-catenin)、上皮标志物上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、间充质标志物神经型钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达水平.两组的定量资料比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验.结果 与非侵袭性MDA-MB-231-NM细胞比较,侵袭性的MDA-MB-231-M细胞中N-cadherin、vimentin和TP53INP2的蛋白表达水平(1.00±0.10比3.15±0.07,1.00±0.07比2.35±0.06,1.00±0.04比2.13±0.07)均升高,E-cadherin的表达水平(1.00±0.06比0.37±0.05)降低,迁移和侵袭细胞数[(43.67±13.25)个比(154.33±15.05)个,(46.67±12.70)个比(162.33±16.50)个]增加,差异有统计学意义(P均<0.001).与对照组比较,过表达TP53INP2的MDA-MB-231-NM细胞中N-cadherin、vimentin和β-catenin的表达水平(1.00±0.06比1.85±0.07,1.00±0.07比2.14±0.04,1.00±0.11比3.63±0.05)均升高,E-cadherin的表达水平(1.00±0.05比0.43±0.05)降低,迁移和侵袭细胞数[(118.00±12.45)个比(318.67±12.50)个,(81.67±12.87)个比(287.33±11.70)个]均升高,差异有统计学意义(P均<0.001),干扰TP53INP2基因后得到相反的结果.与过表达TP53INP2组比较,过表达TP53INP2同时干扰β-catenin后,细胞中N-cadherin和vimentin的表达水平(2.65±0.07比0.46±0.05,4.23±0.08比2.34±0.04)均降低,E-cadherin的表达水平(0.24±0.04比1.12±0.08)升高,迁移和侵袭细胞数[(170.67±12.05)个比(62.00±8.82)个,(122.67±13.70)个比(76.00±12.82)个]均降低,差异有统计学意义(P均<0.001),过表达TP53INP2同时加Wnt/β-catenin信号通路抑制剂(XAV-939)后得到类似的结果.结论 TP53INP2通过激活Wnt/β-catenin信号通路从而调控E-cadherin、N-cadherin、vimentin蛋白的表达,进而促进乳腺癌细胞的侵袭转移.
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