【摘 要】
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本实验利用杆状病毒表达系统表达鲤春病毒血症病毒(SVCV)糖蛋白.将SVCV糖蛋白基因(G)插入到供体质粒pFastBacHTA中,再用构建的质粒pFastBac-G转化E.coli DH10 α Bac感受态细
【机 构】
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华中农业大学水产学院,深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心
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本实验利用杆状病毒表达系统表达鲤春病毒血症病毒(SVCV)糖蛋白.将SVCV糖蛋白基因(G)插入到供体质粒pFastBacHTA中,再用构建的质粒pFastBac-G转化E.coli DH10 α Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选,获得含G基因的重组穿梭载体Bacmid-G.通过脂质体介导将Bacmid-G转染对数生长期的Sf9细胞,获得重组杆状病毒AcNPV-G.AcNPV-G感染Sf9细胞,超声破碎后离心取上清进行SDS-PAGE及Western Blot试验,结果可见大小约为57 kDa的蛋白条带,并与羊抗SVCV血清发生特异性反应.间接免疫荧光试验在感染AcNPV-G的Sf9细胞中观察到荧光信号.试验结果表明,AcNPV-G在Sf9细胞中成功的表达了SVCV糖蛋白,且具有良好的免疫学活性.
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