【摘 要】
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目的:探讨miR-203过表达对人瘢痕成纤维细胞增殖的影响及其机制。方法:组织块法培养原代人瘢痕成纤维细胞6、12、24和48 h;miR-203模拟物(miR-203 mimics)转染人瘢痕成纤维细
【机 构】
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陕西省人民医院烧伤整形医学美容外科; 陕西省人民医院神经内二科;
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目的:探讨miR-203过表达对人瘢痕成纤维细胞增殖的影响及其机制。方法:组织块法培养原代人瘢痕成纤维细胞6、12、24和48 h;miR-203模拟物(miR-203 mimics)转染人瘢痕成纤维细胞并培养24 h;采用CCK-8检测细胞的存活率;流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测miR-203与p53基因家族成员截短型p63(ΔNp63)的靶标关系;qRT-PCR检测miR-203和ΔNp63 mRNA的表达水平;Western blotting检测ΔNp63和P53的蛋白表达水平。结果:miR-203在瘢痕成纤维细胞中表达明显降低(P<0.01),且呈时间依赖性;转染miR-203 mimics后作用24 h,miR-203表达水平显著增加(P<0.01);miR-203过表达使细胞存活率降低至42%(P<0.01),细胞凋亡率增高至45%(P<0.01);miR-203与ΔNp63存在直接靶标关系;miR-203过表达可显著抑制ΔNp63的mRNA和蛋白表达水平,同时显著上调P53的蛋白表达水平(P<0.01)。结论:miR-203过表达可抑制人瘢痕成纤维细胞增殖,其机制可能是通过靶向抑制ΔNp63的表达进而上调P53的蛋白表达。
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