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心脏是脊椎动物发育过程中最早形成的重要器官之一,而先天性心脏病(先心病)是常见的先天性畸形类疾病.其中,转录因子Tbx5突变是导致先心病心手综合征的重要原因,Nkx2.5与瓣膜缺失性先心病密切相关.本研究通过启动子构建探究心脏发育重要因子tbx5a与nkx2.5对下游基因nppa的调控作用.本研究通过PCR分别克隆了斑马鱼tbx5a与nkx2.5基因的全长序列1 491 bp和957bp,成功构建了pMEV-2×HA-tbx5a和pcDNA3.1-myc-nkx2.5表达载体.同时合成了斑马鱼nppa基因2 014 bp的启动子序列,并构建了荧光素酶报告基因表达载体pGL3-nppa-luc.双荧光素酶报告基因检测(Luciferase)实验结果显示,转染pGL3-nppa-luc载体的293T细胞具有较空载组6.3倍的荧光素酶活性(p＜0.001),表明该2 014 bp的nppa序列具备其启动子活性.本研究进一步通过与nppa启动子分别转染tbx5a、nkx2.5及两者共转染的Luciferase实验发现,斑马鱼Tbx5a和Nkx2.5可以协同作用并激活基因nppa的表达12倍(p＜0.001),表明Tbx5a与Nkx2.5结合对下游nppa具备显著上调作用.本研究为进一步揭示转录因子Tbx5a与Nkx2.5对nppa的调控及其在心脏发育中的作用奠定了基础.同时,本研究成功构建具备活性的斑马鱼nppa启动子,对研究其心脏发育相关信号通路的调控机制具有重要意义.