【摘 要】
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目的 利用脐带血单个核细胞(CBMCs)获得诱导多能干细胞(iPSCs)并进一步诱导分化为自然杀伤(NK)细胞.通过与其他来源NK细胞的比较,探讨iPSCs来源NK细胞的生物学特性.方法 获取CBMCs并使用非整合质粒电转法对其进行重编程,利用免疫荧光染色和流式细胞术鉴定获得的iPSCs的多能性因子的表达水平.将CBMCs来源iPSCs(CB-iPSCs)诱导分化为NK细胞,并利用流式细胞术对NK细胞表型进行鉴定.利用肿瘤细胞体外杀伤实验,比较CB-iPSCs来源NK(CB-iPSCs-NK)细胞、脐带血
【机 构】
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300384 天津,协和干细胞基因工程有限公司;300371 天津,南开大学医学院;300384 天津,天津市血液细胞治疗技术企业重点实验室;300384 天津,国家干细胞产品产业化基地;300384
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目的 利用脐带血单个核细胞(CBMCs)获得诱导多能干细胞(iPSCs)并进一步诱导分化为自然杀伤(NK)细胞.通过与其他来源NK细胞的比较,探讨iPSCs来源NK细胞的生物学特性.方法 获取CBMCs并使用非整合质粒电转法对其进行重编程,利用免疫荧光染色和流式细胞术鉴定获得的iPSCs的多能性因子的表达水平.将CBMCs来源iPSCs(CB-iPSCs)诱导分化为NK细胞,并利用流式细胞术对NK细胞表型进行鉴定.利用肿瘤细胞体外杀伤实验,比较CB-iPSCs来源NK(CB-iPSCs-NK)细胞、脐带血来源NK(CB-NK)细胞和外周血来源NK(PB-NK)细胞的杀伤活性.多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验.结果 CBMCs经过携带重编程因子的非整合质粒转染后,启动多能性基因表达,成功地获得iPSCs克隆,经扩增和筛选,最后获得了可稳定增殖的CB-iPSCs.免疫荧光染色和流式细胞术检测结果显示,获得的CB-iPSCs表达高水平的多能性标志物.然后,利用CB-iPSCs成功分化NK细胞.流式细胞术检测NK受体,包括抑制性受体CD94、细胞毒性受体CD16和Nkp46;与CB-NK和PB-NK比较,CB-iPSCs-NK中CD94(94.17﹪±1.80﹪,94.10﹪±1.32﹪比87.60﹪±2.10﹪)和CD16表达(64.53﹪±2.80﹪,92.40﹪±2.00﹪比9.23﹪±3.37﹪)较低,Nkp46表达(85.30﹪±2.36﹪,29.43﹪±9.08﹪比88.00﹪±3.60﹪)较高(P均?<0.05).肿瘤细胞体外杀伤实验结果显示,三种来源NK细胞对K562、MDA-MB-231细胞均具有较好的杀伤作用;但是,对Raji细胞的杀伤作用,CB-iPSCs-NK与CB-NK相似,均弱于PB-NK(P均?<0.05).结论 免疫表型和对不同肿瘤细胞杀伤效果的差异,提示CB-iPSCs-NK细胞具有不同的生物学特性.
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目的:建立蛇床子中蛇床子素的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱选择Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-体积分数0.05％磷酸溶液(体积比70:30),流速为1.0 mL/min,检测波长为322 nm,柱温30℃.结果:蛇床子素的线性关系方程为Y=4.172×104X+1.912×102,在12.5～200μg/mL范围内的峰面积与进样浓度线性关系良好(R2=0.9996).精密度、重复性及稳定性试验的相对标准偏差(RSD)分别
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通过线路调查、文献查阅、民间访谈等方法调查了青海省峡群国家森林公园的常见药用植物.结果表明,该区常见药用植物有128种,分属41科95属,科属分布中,以单种科最多,占总科比65％.生活型以草本植物为主(占比72.62％),入药部位以全草入药占多数(占比72.62％);按药效分,以清热(32.43％)、解表(31.53％)、化湿(27.02％)三类占多数.该区还分布有冬虫夏草、柴胡、羌活、大黄等价值较大的药用植物.调查结果可为今后该区野生药用植物资源的保护与可持续开发利用提供参考.
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