【摘 要】
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目的:利用CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术构建Nudix水解酶家族成员核苷二磷酸连接的部分X基序3[Nudix(nucleotide diphosphate linked moiety X)-type motif 3,Nudt3]基因敲除C57BL/6小鼠模型.方法:根据CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术,在Nudt3基因第2个外显子位置及第2个外显子与第3个外显子间的区域分别设计2个引导RNA(guideRNA,gRNA),结合早期胚胎显微注射技术构建生殖系基因编辑嵌合体小鼠,并从中筛选出
【机 构】
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南京医科大学生物化学与分子生物学系,江苏 南京 211166;南京医科大学医药实验动物中心,江苏 南京 211166
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目的:利用CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术构建Nudix水解酶家族成员核苷二磷酸连接的部分X基序3[Nudix(nucleotide diphosphate linked moiety X)-type motif 3,Nudt3]基因敲除C57BL/6小鼠模型.方法:根据CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术,在Nudt3基因第2个外显子位置及第2个外显子与第3个外显子间的区域分别设计2个引导RNA(guideRNA,gRNA),结合早期胚胎显微注射技术构建生殖系基因编辑嵌合体小鼠,并从中筛选出合适的基因敲除小鼠.在此基础上,采用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)技术验证Nudt3基因在mRNA和蛋白水平的表达.结果:以较高效率获得了 F0代基因编辑小鼠,通过繁育获得了 F1代杂合子小鼠和F2代纯合子小鼠.RT-PCR和Western blot检测结果显示,F2代纯合子小鼠的若干代谢调控组织(如肝脏、下丘脑等)中均无Nudt3基因表达.结论:Nudt3基因敲除小鼠构建成功,为下一步的代谢表型鉴定以及机制研究提供了理想的动物模型.
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目的:观察miR-16是否通过调节NKG2D表达而影响自然杀伤(natural killer,NK)细胞的生物学功能及其抗肿瘤活性.方法:miR-16/15a-/-小鼠和对照小鼠经皮下注射MC38细胞制备结肠癌移植瘤模型,观察两组小鼠皮下实体瘤生长情况;比较普通小鼠生理或荷瘤状态下NK1.1+NKG2D+细胞和NK1.1+NKG2D-细胞内miR-16的表达;分析生理及荷瘤状态下miR-16/15a-/-小鼠NK细胞NKG2D表达、γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)分泌及细胞毒性作用.结果:
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