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目的：研究细胞培养物中支原体污染的快速检测方法。方法：引物选择各型支原体16S和23SrRNA处的共同保守区域，应用NESTED－PCR，检测细胞培养物中的支原体污染。结果：NESTED－PCR能检测6种常见的污染细胞培养物的支原体，扩增的片段分别在360－500bp和150－300bp；NESTED－PCR检测敏感性比一步法高。结论：应用NESTED－PCR检测细胞培养物中的支原体感染，具有快速、特异和敏感的特点。