【摘 要】
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为了避开基于限制性酶切位点分子标记技术的DNA酶切环节,简化其复杂的程序,试验以辣椒为材料,建立了一种新型DNA标记技术——限制性位点扩增多态性(RSAP),并对其反应体系进行
【机 构】
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西北农林科技大学园艺学院,广东省农业科学院蔬菜研究所广东省果蔬新技术研究重点实验室
【出 处】
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西北农林科技大学学报(自然科学版)
【基金项目】
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广东省自然科学基金(000162);广东省农科院院长基金(04-基金-38)
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为了避开基于限制性酶切位点分子标记技术的DNA酶切环节,简化其复杂的程序,试验以辣椒为材料,建立了一种新型DNA标记技术——限制性位点扩增多态性(RSAP),并对其反应体系进行了优化,对RSAP适用性、重复性进行了检验。结果显示,RSAP技术的引物为2条长度均为18 bp的引物,引物的3′端为4~6个碱基的限制性酶切位点序列,接着是12~14个碱基的随机序列,2条引物的限制性位点和随机序列不同;PCR扩增的前5个循环采用35℃的退火温度,随后的35个循环采用48℃的退火温度;在25μL反应体系中,模板DNA用量为20 ng,M g2+浓度为2.5 mm o l/L,dNTP s浓度为0.2 mm o l/L,T aq DNA聚合酶用量为1.5 U,2条引物浓度均为600 nm o l/L;RSAP技术重复性好,适用性广泛,是一种操作简便、产率中等、稳定可靠的DNA标记技术。
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