【摘 要】
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目的 探讨miR-23α对染氟大鼠成骨肉瘤(UMR-106)细胞成骨活性的影响并验证其靶基因.方法 体外培养UMR-106细胞,分别转染miR-23α的激动剂(mimics)和抑制剂(inhibitor),再以0
【机 构】
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贵州医科大学公共卫生学院环境污染与疾病监控教育部重点实验室,贵州贵阳550025;贵州医科大学公共卫生学院营养与食品安全教研室
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目的 探讨miR-23α对染氟大鼠成骨肉瘤(UMR-106)细胞成骨活性的影响并验证其靶基因.方法 体外培养UMR-106细胞,分别转染miR-23α的激动剂(mimics)和抑制剂(inhibitor),再以0、80 μmol/L NaF对细胞进行染毒,培养24h后利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-23α、Ⅰ型胶原(COL1)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)mRNA的表达水平;培养96 h后利用免疫蛋白印记法(Western blot)检测COL1、OPN、Runx2蛋白的表达水平;体外培养人胚胎肾细胞(293T),利用双荧光素酶报告基因法验证miR-23α可能的靶基因.结果 与空白对照组相比,NaF组UMR-106细胞miR-23α、COL1、OPN、Runx2 mRNA表达水平明显升高(P＜0.05);与激动剂对照组比较,过表达组miR-23α mRNA表达水平明显上升、COL1 mRNA表达明显降低(P＜0.05),Runx2、OPN mRNA表达变化不显著(P＞0.05);与抑制剂对照组相比,抑制组miR-23α、COL1、OPN、Runx2 mRNA表达明显降低(P＜0.05).与激动剂对照组比较,过表达组Runx2、OPN蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),COL1蛋白表达水平变化不显著(P＞0.05);与抑制剂对照组相比,抑制组COL1、OPN、Runx2蛋白表达水平均明显降低(P＜0.05).与过表达组比较,过表达+NaF组OPmRNA和蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),COL1、Runx2变化不显著;与抑制组比较,抑制+NaF组COL1、OPN、Runx2 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P＜0.05).过表达miR-23α后的293T细胞中双特异性磷酸酶5(DUSP5 mRNA)和蛋白表达水平均明显降低(P＜0.05),抑制miR-23α后DUSP5表达水平均明显升高(P＜0.05);双荧光素酶报告确定DUSP5为miR-23α的靶基因.结论 miR-23α能促进染氟UMR-106细胞中成骨活性基因的表达:DUSP5是miR-23的靶基因.
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