【摘 要】
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目的 建立子鼠肠上皮细胞(IEC)添加人工基底膜体外原代培养,模拟缺血缺氧损伤后胞内钙含量、膜脂流动性、IEC凋亡及采用钙通道阻断剂的影响.方法 建立子鼠IEC分离与原代培养
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目的 建立子鼠肠上皮细胞(IEC)添加人工基底膜体外原代培养,模拟缺血缺氧损伤后胞内钙含量、膜脂流动性、IEC凋亡及采用钙通道阻断剂的影响.方法 建立子鼠IEC分离与原代培养和缺血缺氧模拟环境,设立对照组(A组),缺氧组(B组),缺血组(C组),缺血缺氧组(D组)及加维拉珀米2mg/L的相应对照组.利用流式细胞仪(FCM)计算凋亡细胞率,激光共聚焦显微镜检测胞内钙含量;自旋标记-顺磁共振技术(ESR)检测膜脂流动性.结果 B、C、D组IEC凋亡较A组明显增加(P＜0.05);加用钙离子阻断剂后B1、C1、D1组较相应对照组减少(P＜0.05).缺血缺氧损伤导致胞内钙超载,尤以D组最显著,其次为B组,C组;加用钙通道阻断剂后细胞内钙含量下降,以D1组最明显(P＜0.01),依次为B1组,C1组.损伤组膜蛋白构像改变、运动速度减慢,表现为强固定化与弱固定化组分谱线高度比值(hs/hw)明显增大及膜蛋白旋转相关时间(τc)显著延长,D组最为明显(P＜0.01),其次为B组,C组;加用钙通道阻断剂后hs/hw和τc有不同程度的恢复,与损伤组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 缺血缺氧损伤后,膜脂流动性发生变化及胞内钙超载和IEC凋亡一致;钙通道阻断剂可降低胞内钙含量,减轻膜蛋白的构像改变,减少细胞凋亡.
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