【摘 要】
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目的原核表达人载脂蛋白AⅠ(ApoAⅠ),对其表达进行优化,同时对ApoAⅠ活性检测方法进行初步研究。方法通过构建3种不同的重组质粒来研究以组氨酸(His)6融合蛋白表达、(His)6-p
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目的原核表达人载脂蛋白AⅠ(ApoAⅠ),对其表达进行优化,同时对ApoAⅠ活性检测方法进行初步研究。方法通过构建3种不同的重组质粒来研究以组氨酸(His)6融合蛋白表达、(His)6-pro(前肽)融合蛋白与单目的基因表达之间的差别,其中(His)6-pro-ApoAⅠ质粒中目的基因第3、4、7位密码子进行无义突变。随后采用镍离子柱纯化重组蛋白,间接法测定ApoAⅠ对被内毒素(LPS)攻击的细胞的保护效果来检测其生物活性。结果单目的基因(pET28a-ApoAⅠ)、组氨酸标记的融合蛋白(pET28a-(His)6-ApoAⅠ)以及(His)6-pro(前肽)融合蛋白(pET28a-(His)6-pro-ApoAⅠ)表达量分别为17、40、95mg/L,经镍柱纯化后的重组蛋白经Western blot、分子筛层析以及生物活性检测,表明原核表达的ApoAⅠ为单体蛋白且具有相应的生物学活性。结论原核表达的ApoAⅠ与人血浆提纯的天然ApoAⅠ分子生物性状无明显差异。
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