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摘要：鲜切莲藕因失去外层组织保护而易发生褐变，而酶促褐变是主要原因。真空包装对鲜切莲藕的褐变有较好的延缓作用，其中多酚氧化酶（polyphenol oxidase，简称PPO）和过氧化物酶（peroxidase，简称POD）的编码基因是参与果蔬褐变的主要基因。但目前关于真空包装对鲜切莲藕片相关酶活性及其编码基因表达的影响研究甚少。分析在 4 ℃ 下真空包装对鲜切莲藕贮藏过程中褐变度和PPO、POD活性及其编码基因表达的影响。结果表明，真空包装对延缓鲜切莲藕褐变有较好效果，且在贮藏期内真空包装鲜切莲藕PPO、POD活性变化与其褐变度大体一致。与此同时，基因NnPPOC和NnPOD4的表达量变化对PPO、POD活性的影响与最终蓬藕的褐变度变化一致，且真空包装对基因NnPPOA、NnPOD1/2/3的表达呈现出不同程度的抑制效果，说明真空包装对鲜切莲藕的NnPPOA/C和NnPOD1/2/3/4基因表达量有降低作用，进而起到延缓褐变的目的。
关键词：鲜切莲藕;褐变;酶活性;基因表达
中图分类号： TS255.3 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2019）07-0210-04
莲藕（Nelumbo nucifera Gaertn.）属睡莲科（Nelumbonaceae）多年生宿根性草本植物，是我国特色的水生蔬菜和出口创汇蔬菜，并逐渐成为最受欢迎的蔬菜之一[1-3]。近年来，随着消费水平的提高和生活方式的变化，鲜切果蔬越来越受关注，而莲藕因其具有营养丰富、组织脆嫩等特点逐渐成为鲜切果蔬商品化中重要的一部分[4-5]。然而，鲜切莲藕在加工贮藏过程中极易发生酶促褐变，对其品质产生不可逆的影响，降低食用价值和缩短货架期[6-7]，因此，抑制酶促褐变是保持鲜切莲藕品质和延长货架期的重要途径。
目前控制鲜切果蔬褐变的方法可以分為保鲜剂（如L-半胱氨酸[8]、二氧化氯[9]、亚硫酸盐[10]、过氧化氢[11]、抗坏血酸及其衍生物[12]、有机酸[13-14]、螯合剂中的乙二胺四乙酸、植酸[15-16]）处理，以及不同包装方式（如热处理[17]、气调贮藏[18]、低温贮藏[19]）处理，其中真空包装作为保鲜技术的一种重要方式，通过抽真空来降低空气压力，减少包装中的氧气含量，从而降低果蔬的呼吸强度并抑制多酚氧化酶的活性，进而延缓鲜切果蔬的褐变进程，现有研究发现，真空包装结合低温贮藏能有效保持鲜切菠萝的品质，使其褐变度明显降低[20]。
目前研究报道显示，PPO和POD基因参与了果蔬褐变进程[21-22]，笔者所在实验室前期研究也发现，NnPPOA、NnPOD1-6是高温诱导下鲜切莲藕褐变的候选基因[19]。但是，关于真空包装对鲜切莲藕中PPO和POD编码基因的影响研究甚少。因此，本试验采用在4 ℃下真空包装方式对在贮藏期内鲜切莲藕的褐变度和多酚氧化酶（polyphenol oxidase，简称PPO）、过氧化物酶（peroxidase，简称POD）活性变化及其编码基因表达的影响进行研究。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
新鲜带泥莲藕（品种为武植二号），购于武汉民生金旺果蔬批发市场;NaH2PO4、Na2HPO4、无水碳酸钠、丙酮、磷酸、聚乙二醇6000、无水乙醇、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、邻苯二酚、愈创木酚氯仿、异戊醇、疏基乙醇、十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、Tris、LiCl、NaOH（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）;30%过氧化氢（分析纯，上海威奥生物科技有限公司）。
cDNA合成试剂盒、Ssofast反应试剂盒（美国Bio-Rad）;Trition X-100（Biosharp生物科技有限公司）;50×TAE（北京百奥莱博科技有限公司）;TaKaRa胶回收试剂盒、E×Tap酶反应试剂盒、DH5α（TaKaRa生物有限公司）;去除DNA试剂盒（美国Thermo）;琼脂糖凝胶（北京沃比森科技有限公司）;DEPC（Biosharp生物科技有限公司）。
1.2 仪器与设备
AR2140型电子分析天平[奥赛斯国际贸易（上海）有限公司];GL-20G-Ⅱ离心机（上海安亭科学仪器厂）;IMS-20雪科制冰机（常熟市雪科电器有限公司）;XHF-D内切式匀浆机（宁波新芝生物科技股份有限公司）;HH-S4数显恒温水浴锅（江苏省金坛市医疗仪器厂）;101-3EB型电热鼓风干燥箱（北京市永光明医疗仪器有限公司）;DRP-9082型电热恒温培养箱（上海恒一科学仪器有限公司）;HYC-326A医用冷藏箱（青岛海尔特种电器有限公司）;DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器（巩义市予华仪器有限责任公司）;A360型紫外可见分光光度计[翱艺仪器（上海）有限公司];气调包装机成套设备（上海福帝包装机械有限公司）;FHW-450型保鲜膜封接机（浙江江南实业有限公司）;DYCP-31DN电泳仪（北京六一仪器厂）;T100 TM Thermal Cycler PCR仪、CFX96荧光PCR仪、凝胶成像系统（美国Bio-Rad）。
1.3 方法
1.3.1 原料预处理 将购买来的新鲜莲藕运送到实验室对其表面淤泥进行清洗，并挑选尺寸和表面颜色均匀且无损伤的莲藕置于4 ℃下预冷24 h后，使用刀沿着莲藕的横截面切成5 mm厚的切片，并将其立即转入清水中浸泡3 min，然后捞出莲藕切片并用滤纸快速吸干表层水分，分别进行真空包装和常压包装（对照）并转入4 ℃冰箱中进行为期35 d的贮藏试验，每盒放置鲜切莲藕5片，每个处理时间点（贮藏0、7、14、21、28、35 d）设置3组平行。
1.3.2 褐变度的测定 通过对张京芳的鲜切莲藕褐变检测方法[23]进行改进，将存放于4 ℃冰箱内2种包装方式下的莲藕每隔7 d各取出3盒切碎，并快速称取3.0 g置于离心瓶中，加入30 mL预冷的双蒸水，以冰浴的方式高速匀浆20 s后，在4 ℃下以10 000 r/min的转速离心10 min，取上清液 3.5 mL 于10 mL离心管中并在25 ℃水浴锅中保温5 min，于410 nm条件下测其吸光度，褐变度表示为D410 nm×10，每个处理3组平行。 1.3.3 PPO和POD活性的测定 按照之前的研究方法对PPO和POD进行提取和活性测定[19，24]。4 ℃下2种包装方式的莲藕切片 15 g 于冰浴的研钵中，倒入30 mL保存于 -20 ℃ 条件下的丙酮进行充分研磨后，置于通风橱中挥发干燥，称取1.5 g干燥后的样品于烧杯中，加入30 mL pH值为7.0的磷酸缓冲液，充分搅拌10 min得到总酶的粗提取液，分别吸取5 mL粗酶液于2组试管中，每组3个平行，在第1组试管中先后加入15 mL pH值为7.0的磷酸缓冲液和 5 mL 邻苯二酚，摇匀得到PPO提取液，在第2组试管中先后加入5 mL pH值为5.0的醋酸缓冲液和5 mL愈创木酚，摇匀后加入5 mL 0.1%的过氧化氢溶液得到POD提取液，通过分光光度法将PPO、POD活性单位（U）分别定义为在420、470 nm 处1 min引起吸光度改变0.001、0.01所需的酶量。
1.3.4 RNA提取和cDNA合成 根据现有的文献提取莲藕样品中总RNA[25]，同时将有污染的基因组DNA痕迹从总RNA中去除，以确保检测的准确性，并使用iScript cDNA合成试剂盒（Bio-Rad）进行相关cDNA的合成[22]。
1.3.5 实时荧光定量PCR 用于PCR分析的寡核苷酸引物在Min等的研究中已经得到验证[25]，据此使用Ssofast EvaGreen Supermix试剂盒（Bio-Rad）和CFX96荧光PCR进行实时定量PCR，以对相关基因的表达情况开展后续研究[26]。
1.3.6 数据分析 对所得数据进行整理并使用Origin 8.0软件进行绘图分析。
2 结果与分析
2.1 褐变度
如图1所示，隨着贮藏时间的延长，真空包装鲜切莲藕的褐变度（browning degree）仅从初始的0.260增加到0.313，而常压包装鲜切莲藕的褐变度从初始的0.260增加到0.461。且真空包装下鲜切莲藕的褐变度明显低于常压包装。因此，该结果进一步证明真空包装对鲜切莲藕的褐变进程有较好的延缓作用[27-28]。
2.2 真空包装对鲜切莲藕PPO、POD活性的影响
PPO是参与果蔬褐变最重要的酚酶[29]。如图2所示，在4 ℃贮藏期内，2种包装方式下鲜切莲藕的PPO活性呈现明显不同的增长趋势，其中真空包装的PPO活性从处理当天的0.452 U/g增加至贮藏35 d的0.571 U/g，而常压包装的PPO活性从处理当天的0.452 U/g增加至贮藏35 d的 1.311 U/g，由此可见，在贮藏期内，真空包装能有效抑制PPO活性的增加。
POD在H2O2存在的条件下促进果蔬褐变的发生[30-31]。如图3所示，整个贮藏期内2种包装方式下的鲜切莲藕POD活性均呈增加趋势，4 ℃真空包装下的POD活性从处理当天的0.061 U/g增加到贮藏35 d的0.095 U/g，而4 ℃常压包装下的POD活性从处理当0天的0.061 U/g上升到了贮藏35 d的0.144 U/g。贮藏14 d之前，2种包装方式下POD活性未出现明显差别，贮藏14 d后真空包装对POD活性的升高开始产生抑制效果。
根据相关研究可知，PPO和POD参与了鲜切莲藕的酶促褐变[32]。通过分析2种包装方式对PPO、POD活性变化的影响发现，在贮藏期内，4 ℃真空包装对鲜切莲藕的PPO活性的升高产生了明显的抑制效果，贮藏7 d后，真空包装对POD活性的增加开始产生抑制作用，由此可以发现，真空包装对PPO、POD活性的抑制作用有利于延缓莲藕褐变度的增加，进而使品质得到更好的保持，此结果与前人研究报道[33-34]相一致。
2.3 鲜切莲藕褐变相关基因NnPPO、NnPOD基因表达表达分析
由图4可知，在真空包装环境下，NnPPOC的表达量始终被抑制，而真空包装在贮藏7 d后开始抑制基因NnPPOA的表达，并在贮藏35 d时基因NnPPOA的表达量最低，与常压包装相比，真空包装对基因NnPPOA的表达在贮藏28 d后产生明显的抑制作用，且常压下基因NnPPOA、NnPPOC的表达均被诱导，这与真空包装下PPO活性明显低于常压包装相吻合。由此可知，真空包装能通过下调NnPPOA和NnPPOC的表达来降低PPO活性。
由图5可知，与对照组相比，真空包装鲜切莲藕的NnPOD1、NnPOD2、NnPOD3基因表达量在整个贮藏期内始终处于被抑制的状态，这与酶活性的变化相吻合。在2种包装方式的样品中，NnPOD4和NnPOD5的表达量均呈现不同程度的增加，这可能参与到其他品质变化的调控中，有待于后期的进一步研究。NnPOD7的表达在2种包装状态下整体被抑制，且无明显差异。与之不同的是，基因NnPOD6的表达被真空明显诱导。
真空包装对鲜切莲藕基因NnPPOC的表达影响与PPO活性变化及莲藕褐变程度大体同步，且在贮藏7 d后，基因NnPPOA的表达受到真空抑制作用也参与到降低PPO活性和延缓莲藕褐变进程中;与此同时，在贮藏期内，真空包装对莲藕基因NnPOD1/2/3的表达始终表现出抑制效果，在贮藏7 d后，基因NnPOD4的表达量开始因受到真空的抑制作用而下降，这与POD活性变化及莲藕褐变程度相一致。常艳等通过研究发现，多酚氧化酶基因（PbPPO）是参与砀山酥梨品质变化的关键基因[35]。韩艳文等通过不同降温方式处理采收后的鸭梨发现，与POD活性相关基因的表达与鸭梨的褐变度变化和品质变化有直接的联系[36]。笔者所在实验室在前期研究中发现，高温下新鲜莲藕褐变度的增加与NnPPOA、NnPOD1-6基因表达量的上调有关[19]。因此，笔者认为，NnPPOA/C和NnPOD1/2/3可能参与了真空包装下鲜切莲藕褐变延缓进程，是鲜切莲藕褐变的重要候选基因。 3 结论
在4 ℃贮藏期内，真空包装相对于常压包装能明显降低鲜切莲藕的褐变度，同时发现，真空包装鲜切莲藕的PPO活性均始终低于常压包装，POD活性在贮藏7 d后被抑制并逐步低于常压包装，这与2种包装方式下莲藕褐变度变化情况大体一致。此外，NnPPOA/C和NnPOD1/2/3/4受真空包装影响均参与了PPO、POD活性变化的调控过程，且基因NnPPOC、NnPOD4的表达情况分别对PPO、POD活性的影响与最终莲藕的褐变度变化相吻合。说明真空包装可能通过下调NnPPOA/C和NnPOD1/2/3的表达量来延缓鲜切莲藕褐变进程。
参考文献：
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关键词：鲜切莲藕;褐变;酶活性;基因表达
中图分类号： TS255.3 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2019）07-0210-04
莲藕（Nelumbo nucifera Gaertn.）属睡莲科（Nelumbonaceae）多年生宿根性草本植物，是我国特色的水生蔬菜和出口创汇蔬菜，并逐渐成为最受欢迎的蔬菜之一[1-3]。近年来，随着消费水平的提高和生活方式的变化，鲜切果蔬越来越受关注，而莲藕因其具有营养丰富、组织脆嫩等特点逐渐成为鲜切果蔬商品化中重要的一部分[4-5]。然而，鲜切莲藕在加工贮藏过程中极易发生酶促褐变，对其品质产生不可逆的影响，降低食用价值和缩短货架期[6-7]，因此，抑制酶促褐变是保持鲜切莲藕品质和延长货架期的重要途径。
目前控制鲜切果蔬褐变的方法可以分為保鲜剂（如L-半胱氨酸[8]、二氧化氯[9]、亚硫酸盐[10]、过氧化氢[11]、抗坏血酸及其衍生物[12]、有机酸[13-14]、螯合剂中的乙二胺四乙酸、植酸[15-16]）处理，以及不同包装方式（如热处理[17]、气调贮藏[18]、低温贮藏[19]）处理，其中真空包装作为保鲜技术的一种重要方式，通过抽真空来降低空气压力，减少包装中的氧气含量，从而降低果蔬的呼吸强度并抑制多酚氧化酶的活性，进而延缓鲜切果蔬的褐变进程，现有研究发现，真空包装结合低温贮藏能有效保持鲜切菠萝的品质，使其褐变度明显降低[20]。
目前研究报道显示，PPO和POD基因参与了果蔬褐变进程[21-22]，笔者所在实验室前期研究也发现，NnPPOA、NnPOD1-6是高温诱导下鲜切莲藕褐变的候选基因[19]。但是，关于真空包装对鲜切莲藕中PPO和POD编码基因的影响研究甚少。因此，本试验采用在4 ℃下真空包装方式对在贮藏期内鲜切莲藕的褐变度和多酚氧化酶（polyphenol oxidase，简称PPO）、过氧化物酶（peroxidase，简称POD）活性变化及其编码基因表达的影响进行研究。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
新鲜带泥莲藕（品种为武植二号），购于武汉民生金旺果蔬批发市场;NaH2PO4、Na2HPO4、无水碳酸钠、丙酮、磷酸、聚乙二醇6000、无水乙醇、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、邻苯二酚、愈创木酚氯仿、异戊醇、疏基乙醇、十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、Tris、LiCl、NaOH（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）;30%过氧化氢（分析纯，上海威奥生物科技有限公司）。
cDNA合成试剂盒、Ssofast反应试剂盒（美国Bio-Rad）;Trition X-100（Biosharp生物科技有限公司）;50×TAE（北京百奥莱博科技有限公司）;TaKaRa胶回收试剂盒、E×Tap酶反应试剂盒、DH5α（TaKaRa生物有限公司）;去除DNA试剂盒（美国Thermo）;琼脂糖凝胶（北京沃比森科技有限公司）;DEPC（Biosharp生物科技有限公司）。
1.2 仪器与设备
AR2140型电子分析天平[奥赛斯国际贸易（上海）有限公司];GL-20G-Ⅱ离心机（上海安亭科学仪器厂）;IMS-20雪科制冰机（常熟市雪科电器有限公司）;XHF-D内切式匀浆机（宁波新芝生物科技股份有限公司）;HH-S4数显恒温水浴锅（江苏省金坛市医疗仪器厂）;101-3EB型电热鼓风干燥箱（北京市永光明医疗仪器有限公司）;DRP-9082型电热恒温培养箱（上海恒一科学仪器有限公司）;HYC-326A医用冷藏箱（青岛海尔特种电器有限公司）;DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器（巩义市予华仪器有限责任公司）;A360型紫外可见分光光度计[翱艺仪器（上海）有限公司];气调包装机成套设备（上海福帝包装机械有限公司）;FHW-450型保鲜膜封接机（浙江江南实业有限公司）;DYCP-31DN电泳仪（北京六一仪器厂）;T100 TM Thermal Cycler PCR仪、CFX96荧光PCR仪、凝胶成像系统（美国Bio-Rad）。
1.3 方法
1.3.1 原料预处理 将购买来的新鲜莲藕运送到实验室对其表面淤泥进行清洗，并挑选尺寸和表面颜色均匀且无损伤的莲藕置于4 ℃下预冷24 h后，使用刀沿着莲藕的横截面切成5 mm厚的切片，并将其立即转入清水中浸泡3 min，然后捞出莲藕切片并用滤纸快速吸干表层水分，分别进行真空包装和常压包装（对照）并转入4 ℃冰箱中进行为期35 d的贮藏试验，每盒放置鲜切莲藕5片，每个处理时间点（贮藏0、7、14、21、28、35 d）设置3组平行。
1.3.2 褐变度的测定 通过对张京芳的鲜切莲藕褐变检测方法[23]进行改进，将存放于4 ℃冰箱内2种包装方式下的莲藕每隔7 d各取出3盒切碎，并快速称取3.0 g置于离心瓶中，加入30 mL预冷的双蒸水，以冰浴的方式高速匀浆20 s后，在4 ℃下以10 000 r/min的转速离心10 min，取上清液 3.5 mL 于10 mL离心管中并在25 ℃水浴锅中保温5 min，于410 nm条件下测其吸光度，褐变度表示为D410 nm×10，每个处理3组平行。 1.3.3 PPO和POD活性的测定 按照之前的研究方法对PPO和POD进行提取和活性测定[19，24]。4 ℃下2种包装方式的莲藕切片 15 g 于冰浴的研钵中，倒入30 mL保存于 -20 ℃ 条件下的丙酮进行充分研磨后，置于通风橱中挥发干燥，称取1.5 g干燥后的样品于烧杯中，加入30 mL pH值为7.0的磷酸缓冲液，充分搅拌10 min得到总酶的粗提取液，分别吸取5 mL粗酶液于2组试管中，每组3个平行，在第1组试管中先后加入15 mL pH值为7.0的磷酸缓冲液和 5 mL 邻苯二酚，摇匀得到PPO提取液，在第2组试管中先后加入5 mL pH值为5.0的醋酸缓冲液和5 mL愈创木酚，摇匀后加入5 mL 0.1%的过氧化氢溶液得到POD提取液，通过分光光度法将PPO、POD活性单位（U）分别定义为在420、470 nm 处1 min引起吸光度改变0.001、0.01所需的酶量。
1.3.4 RNA提取和cDNA合成 根据现有的文献提取莲藕样品中总RNA[25]，同时将有污染的基因组DNA痕迹从总RNA中去除，以确保检测的准确性，并使用iScript cDNA合成试剂盒（Bio-Rad）进行相关cDNA的合成[22]。
1.3.5 实时荧光定量PCR 用于PCR分析的寡核苷酸引物在Min等的研究中已经得到验证[25]，据此使用Ssofast EvaGreen Supermix试剂盒（Bio-Rad）和CFX96荧光PCR进行实时定量PCR，以对相关基因的表达情况开展后续研究[26]。
1.3.6 数据分析 对所得数据进行整理并使用Origin 8.0软件进行绘图分析。
2 结果与分析
2.1 褐变度
如图1所示，隨着贮藏时间的延长，真空包装鲜切莲藕的褐变度（browning degree）仅从初始的0.260增加到0.313，而常压包装鲜切莲藕的褐变度从初始的0.260增加到0.461。且真空包装下鲜切莲藕的褐变度明显低于常压包装。因此，该结果进一步证明真空包装对鲜切莲藕的褐变进程有较好的延缓作用[27-28]。
2.2 真空包装对鲜切莲藕PPO、POD活性的影响
PPO是参与果蔬褐变最重要的酚酶[29]。如图2所示，在4 ℃贮藏期内，2种包装方式下鲜切莲藕的PPO活性呈现明显不同的增长趋势，其中真空包装的PPO活性从处理当天的0.452 U/g增加至贮藏35 d的0.571 U/g，而常压包装的PPO活性从处理当天的0.452 U/g增加至贮藏35 d的 1.311 U/g，由此可见，在贮藏期内，真空包装能有效抑制PPO活性的增加。
POD在H2O2存在的条件下促进果蔬褐变的发生[30-31]。如图3所示，整个贮藏期内2种包装方式下的鲜切莲藕POD活性均呈增加趋势，4 ℃真空包装下的POD活性从处理当天的0.061 U/g增加到贮藏35 d的0.095 U/g，而4 ℃常压包装下的POD活性从处理当0天的0.061 U/g上升到了贮藏35 d的0.144 U/g。贮藏14 d之前，2种包装方式下POD活性未出现明显差别，贮藏14 d后真空包装对POD活性的升高开始产生抑制效果。
根据相关研究可知，PPO和POD参与了鲜切莲藕的酶促褐变[32]。通过分析2种包装方式对PPO、POD活性变化的影响发现，在贮藏期内，4 ℃真空包装对鲜切莲藕的PPO活性的升高产生了明显的抑制效果，贮藏7 d后，真空包装对POD活性的增加开始产生抑制作用，由此可以发现，真空包装对PPO、POD活性的抑制作用有利于延缓莲藕褐变度的增加，进而使品质得到更好的保持，此结果与前人研究报道[33-34]相一致。
2.3 鲜切莲藕褐变相关基因NnPPO、NnPOD基因表达表达分析
由图4可知，在真空包装环境下，NnPPOC的表达量始终被抑制，而真空包装在贮藏7 d后开始抑制基因NnPPOA的表达，并在贮藏35 d时基因NnPPOA的表达量最低，与常压包装相比，真空包装对基因NnPPOA的表达在贮藏28 d后产生明显的抑制作用，且常压下基因NnPPOA、NnPPOC的表达均被诱导，这与真空包装下PPO活性明显低于常压包装相吻合。由此可知，真空包装能通过下调NnPPOA和NnPPOC的表达来降低PPO活性。
由图5可知，与对照组相比，真空包装鲜切莲藕的NnPOD1、NnPOD2、NnPOD3基因表达量在整个贮藏期内始终处于被抑制的状态，这与酶活性的变化相吻合。在2种包装方式的样品中，NnPOD4和NnPOD5的表达量均呈现不同程度的增加，这可能参与到其他品质变化的调控中，有待于后期的进一步研究。NnPOD7的表达在2种包装状态下整体被抑制，且无明显差异。与之不同的是，基因NnPOD6的表达被真空明显诱导。
真空包装对鲜切莲藕基因NnPPOC的表达影响与PPO活性变化及莲藕褐变程度大体同步，且在贮藏7 d后，基因NnPPOA的表达受到真空抑制作用也参与到降低PPO活性和延缓莲藕褐变进程中;与此同时，在贮藏期内，真空包装对莲藕基因NnPOD1/2/3的表达始终表现出抑制效果，在贮藏7 d后，基因NnPOD4的表达量开始因受到真空的抑制作用而下降，这与POD活性变化及莲藕褐变程度相一致。常艳等通过研究发现，多酚氧化酶基因（PbPPO）是参与砀山酥梨品质变化的关键基因[35]。韩艳文等通过不同降温方式处理采收后的鸭梨发现，与POD活性相关基因的表达与鸭梨的褐变度变化和品质变化有直接的联系[36]。笔者所在实验室在前期研究中发现，高温下新鲜莲藕褐变度的增加与NnPPOA、NnPOD1-6基因表达量的上调有关[19]。因此，笔者认为，NnPPOA/C和NnPOD1/2/3可能参与了真空包装下鲜切莲藕褐变延缓进程，是鲜切莲藕褐变的重要候选基因。 3 结论
在4 ℃贮藏期内，真空包装相对于常压包装能明显降低鲜切莲藕的褐变度，同时发现，真空包装鲜切莲藕的PPO活性均始终低于常压包装，POD活性在贮藏7 d后被抑制并逐步低于常压包装，这与2种包装方式下莲藕褐变度变化情况大体一致。此外，NnPPOA/C和NnPOD1/2/3/4受真空包装影响均参与了PPO、POD活性变化的调控过程，且基因NnPPOC、NnPOD4的表达情况分别对PPO、POD活性的影响与最终莲藕的褐变度变化相吻合。说明真空包装可能通过下调NnPPOA/C和NnPOD1/2/3的表达量来延缓鲜切莲藕褐变进程。
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