【摘 要】
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目的通过突变整合于宿主细胞中的人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)16型的E6、E7致癌基因，探索预防和治疗宫颈癌的新方法。方法以SiHa细胞系为研究对象，设计靶向其内整合的HPV16 E6和E7基因的小引导RNA(small guide RNA，sgRNA)，将其克隆入CRISPR/Cas9质粒，并应用其将E6、E7基因敲除，随后应用错位酶切法和克隆测序检测突变效果
【机 构】
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哈尔滨医科大学微生物学教研室及伍连德研究所 150081,哈尔滨医科大学微生物学教研室及伍连德研究所 150081,哈尔滨医科大学微生物学教研室及伍连德研究所 150081,哈尔滨医科大学微生物学教研
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目的通过突变整合于宿主细胞中的人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)16型的E6、E7致癌基因，探索预防和治疗宫颈癌的新方法。
方法以SiHa细胞系为研究对象，设计靶向其内整合的HPV16 E6和E7基因的小引导RNA(small guide RNA，sgRNA)，将其克隆入CRISPR/Cas9质粒，并应用其将E6、E7基因敲除，随后应用错位酶切法和克隆测序检测突变效果，并用细胞迁移与侵袭实验检测细胞的侵袭力。
结果设计的sgRNA被克隆入CRISPR/Cas9质粒，经测序克隆正确。该质粒转染SiHa细胞后，可以引发靶点DNA的突变，致使E6和E7基因密码子改变，无法正确表达。E6、E7突变后SiHa细胞侵袭及增殖能力下降(t检验，pCas9组与psgE6-1-1-Cas9组相比，P＝0.0006; pCas9组与psgE7-1-2-Cas9组相比，P＝0.0007)，促进肿瘤抑制因子P53的表达恢复，细胞的恶性度降低。
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