【摘 要】
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为确认转录因子NF-κB对牛MMP9启动子的影响,利用P65过表达载体转染牛乳腺上皮细胞,检测其在蛋白水平对MMP9表达的影响;然后构建牛MMP9启动子双荧光素酶报告载体,转染Hela细胞后用双荧光素酶实验检测启动子活性,确定MMP9基因核心启动子区域,同时添加NF-κB抑制剂(Celastrol)确认P65对启动子活性的影响.结果为P65过表达能显著提高牛乳腺上皮细胞中的p-P65、P65和MMP9的蛋白表达;牛MMP9基因启动子上转录因子NF-κB结合位点在-420～-80 bp区域;NF-κB抑制剂
【机 构】
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东北农业大学乳品科学教育部重点实验室,哈尔滨 150030
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为确认转录因子NF-κB对牛MMP9启动子的影响,利用P65过表达载体转染牛乳腺上皮细胞,检测其在蛋白水平对MMP9表达的影响;然后构建牛MMP9启动子双荧光素酶报告载体,转染Hela细胞后用双荧光素酶实验检测启动子活性,确定MMP9基因核心启动子区域,同时添加NF-κB抑制剂(Celastrol)确认P65对启动子活性的影响.结果为P65过表达能显著提高牛乳腺上皮细胞中的p-P65、P65和MMP9的蛋白表达;牛MMP9基因启动子上转录因子NF-κB结合位点在-420～-80 bp区域;NF-κB抑制剂显著降低牛MMP9基因启动子活性.因此转录因子NF-κB可直接靶向牛MMP9基因启动子区域并促进MMP9基因表达.
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