【摘 要】
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目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)BDNF-AS在肾癌组织中的表达,及其对肾癌细胞增殖、迁移能力的影响和分子机制。方法采用实时反转录聚合酶链反应(rRT-PCR)检测2017年5月至2018年7月鄂东医疗集团黄石市中心医院67例肾癌患者癌组织、癌旁组织及正常肾小管上皮细胞株HK-2和肾癌细胞株A498、ACHN、OS-RC-2、Caki-1、786-O中BDNF-AS基因表达水平。以BDNF
【机 构】
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目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)BDNF-AS在肾癌组织中的表达,及其对肾癌细胞增殖、迁移能力的影响和分子机制。
方法采用实时反转录聚合酶链反应(rRT-PCR)检测2017年5月至2018年7月鄂东医疗集团黄石市中心医院67例肾癌患者癌组织、癌旁组织及正常肾小管上皮细胞株HK-2和肾癌细胞株A498、ACHN、OS-RC-2、Caki-1、786-O中BDNF-AS基因表达水平。以BDNF-AS表达水平最低的肾癌细胞株Caki-1为研究对象,瞬时转染BDNF-AS过表达质粒(实验组)或载有无意义序列的质粒(对照组)。采用rRT-PCR检测转染效率。转染Caki-1细胞24 h后,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞增殖情况,采用Transwell迁移实验检测细胞迁移能力,rRT-PCR检测G型酪氨酸磷酸酶受体(PTPRG)mRNA水平,采用蛋白质印迹法检测PTPRG及PI3K-AKT通路相关蛋白的表达水平。
结果肾癌组织中BDNF-AS相对表达量低于癌旁组织(0.96±0.24比4.62±0.84,t=41.76,P<0.01)。各肾癌细胞株中BDNF-AS相对表达量均低于正常肾小管上皮细胞株HK-2(均P<0.05),其中Caki-1细胞中的相对表达量最低(0.10±0.01)。实验组Caki-1细胞BDNF-AS相对表达量高于对照组(P<0.01)。转染第2天起,实验组Caki-1细胞增殖能力低于对照组(均P<0.05)。转染24 h后的Caki-1细胞迁移15 h后,实验组迁移Caki-1细胞数低于对照组[(51±8)个比(192±25)个,t=5.31,P<0.01]。转染48 h后,实验组Caki-1细胞中PTPRG mRNA相对表达量(P<0.01)及蛋白表达水平均高于对照组,实验组Caki-1细胞中PI3K-AKT信号通路相关蛋白p-PI3K、p-AKT、p-Tpl2的表达水平均低于对照组。
结论BDNF-AS在肾癌组织和细胞株中表达均下调,过表达BDNF-AS可抑制肾癌Caki-1细胞的增殖和迁移能力,其分子机制可能与BDNF-AS促进PTPRG基因表达、干扰PI3K-AKT信号通路的转导有关。
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