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克隆、表达梅毒螺旋体重组蛋白Tp0844,纯化表达产物并进行免疫反应性分析,筛选与宿主具有高反应性的Tp主要蛋白。
方法通过生物信息学分析,获取Tp0844基因序列,构建原核载体进行诱导表达;Ni-NTA亲合层析柱纯化重组蛋白,Western印迹法检测其重组蛋白与梅毒阴阳性血清的反应情况。
结果成功构建PET-30a(+)-Tp0844原核表达重组体,经诱导表达后发现该重组体可高表达出可溶性的重组蛋白,经亲和层析纯化后获得了相对分子质量为43 000的重组蛋白;以梅毒IgG抗体阴、阳性血清为一抗,采用Western印迹法检测发现,Tp0844重组蛋白与梅毒阳性血清能发生明显特异反应,而与健康阴性血清未出现反应条带。
结论可溶性重组表达的Tp0844蛋白具有较好的免疫反应性,可作为梅毒发病机制研究的候选抗原。