几乎全长的CRISP90基因的扩增与克隆

来源 :哈尔滨医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:z675083421
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以自行设计合成的一对引物(#P5/#731),应用聚合酶链反应技术(PCR),从基因组DNA中扩增了编码90KDa的变异性表面特异蛋白的几乎全长的基因。PCR产物被克隆到质粒中,并通过双脱氧链终止法将插入的基因片段进行了序列分析,推导出的氨基酸序列半胱氨酸含量为11.8mol%,而且多数的半胱氨酸是以CXXC基序重复出现26次,序列分析发现有2个天冬酰胺连接的糖基位点。基因序列显示出一个2019bp长的开放阅读框架。同源性比较发现它与编码72KDa人的兰氏贾第鞭毛虫虫株的变异性表面蛋白基因,有相当强的同源性 A pair of primers (# P5 / # 731) designed by the authors was designed and an almost full-length gene encoding a 90 kDa variant surface-specific protein was amplified from genomic DNA using polymerase chain reaction (PCR). The PCR product was cloned into a plasmid and the inserted gene fragment was sequenced by the dideoxy chain termination method. The deduced amino acid sequence had a cysteine ​​content of 11.8 mol%, and most of the cysteines were The CXXC motif was repeated 26 times and sequence analysis revealed two asparagine linked glycosyl sites. The gene sequence shows a 2019bp long open reading frame. Homology comparison showed that it had a rather strong homology with the mutant surface protein gene coding for the 72 kDa human Giardia lamblia strain
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