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目的
探讨泛素修饰酶A20在游离脂肪酸(FFA)刺激下的表达变化及作用通路。
方法用0.5 mmol/L的混合FFA刺激HepG2细胞和U937细胞，采用Western印迹法检测A20蛋白表达水平、NF-κB通路蛋白表达水平(磷酸化p65，磷酸化IκBα)和MAPK通路蛋白表达水平(磷酸化Jun激酶，Jun激酶，磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)，ERK，磷酸化p38和p38)。流式细胞仪检测细胞上清液中IL-12p、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10和IL-8的浓度。统计学处理采用t检验。
结果A20蛋白水平可随着FFA刺激时间不同而发生变化。NF-κB和MAPK通路在FFA刺激后被激活。FFA刺激HepG2后，IL-6与IL-8分泌均增加，且均在24 h分泌量最大，与对照组相比，IL-8为(423.8±8.9) pg/mL比 (12.4±4.5) pg/mL，差异有统计学意义(t＝41.28，P<0.01)；IL-6为(4 082.0±423.6) pg/mL比(52.9±29.5) pg/mL，差异有统计学意义(t＝9.49，P<0.01)。FFA刺激U937细胞后，与对照组相比，IL-8分泌增加，在一定时间内成时间依赖关系，24 h分泌量最大，为(200.6±5.7) pg/mL比(5.0±3.9) pg/mL，差异有统计学意义(t＝28.16，P<0.01)。未检测到IL-10、IL-12p、IL-1β和TNF-α的分泌。
结论用FFA模拟的体外脂肪变模型可刺激A20蛋白的表达变化和炎性因子的分泌，NF-κB通路和MAPK通路均参与了U937和HepG2对FFA的应答。