探讨外源性一氧化碳释放分子2(CORM-2)对LPS所致健康人外周血中血小板过度活化的作用及分子机制。

采集1名健康成年人的静脉血，离心分离出富血小板血浆(PRP)，分装于硅化后的试管，按随机数字表法分为正常对照组、LPS组、无活性CORM-2(iCORM-2)组、10 μmol/L CORM-2组、50 μmol/L CORM-2组，每组3管。正常对照组不进行任何处理；LPS组接受20 mL 10 μg/mL的LPS刺激；iCORM-2组、10 μmol/L CORM-2组、50 μmol/L CORM-2组在接受上述LPS刺激的同时分别接受50 μmol/L iCORM-2、10 μmol/L CORM-2、50 μmol/L CORM-2的干预，用量均为20 mL。培养30 min后玻瓶法检测血小板黏附率；免疫荧光法检测血小板侵袭至纤维蛋白原的数量；比浊法检测血小板聚集率；取PRP制备贫血小板血浆(PPP)及血小板，化学荧光素法检测PPP及血小板内ATP含量；流式细胞仪检测血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰbα和GPⅥ表达；蛋白质印迹法、免疫沉淀法分别检测血小板糖原合酶激酶3β(GSK-3β)及磷酸化GSK-3β表达。以上指标均重复测定3次。对数据行单因素方差分析、SNK检验。

与正常对照组比较，LPS组、iCORM-2组PRP中血小板黏附率、侵袭至纤维蛋白原上的血小板数量、血小板聚集率、血小板GPⅠbα和GPⅥ表达量及PPP中ATP含量均明显增加，血小板内ATP含量均明显减少，P值均小于0.05。与LPS组比较，iCORM-2组上述各指标无明显变化(P值均大于0.05)；10 μmol/L CORM-2组、50 μmol/L CORM-2组血小板内ATP含量明显增加，其余上述各指标均明显减少，P值均小于0.05。正常对照组、LPS组、iCORM-2组、10 μmol/L CORM-2组、50 μmol/L CORM-2组PRP中血小板GSK-3β表达量分别为0.550±0.060、1.437±0.214、1.210±0.108、0.720±0.010、0.670±0.010，磷酸化GSK-3β表达量分别为0.950±0.070、1.607±0.121、1.420±0.040、1.167±0.015、0.513±0.122。LPS组、iCORM-2组PRP中血小板GSK-3β表达量及磷酸化GSK-3β表达量较正常对照组明显增加(P值均小于0.05)，iCORM-2组PRP中血小板GSK-3β表达量及磷酸化GSK-3β表达量与LPS组相近(P值均大于0.05)，10 μmol/L CORM-2组、50 μmol/L CORM-2组PRP中血小板GSK-3β表达量及磷酸化GSK-3β表达量较LPS组明显减少(P值均小于0.05)。

LPS刺激可致健康人外周血中血小板异常活化，CORM-2的干预能够有效地抑制血小板的过度活化，其机制可能涉及GP介导的GSK-3β的磷酸化。