【摘 要】
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通过设计大量引物,探索在植物甲基化引物设计中长、短引物的设计方法及其相应的PCR条件,同时比较不同Taq酶对甲基化率影响。结果表明:17~30 bp短引物适合使用Touch-down程序P
【机 构】
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中国科学院沈阳应用生态研究所污染生态与环境工程重点实验室; 辽宁何氏医学院; 辽宁大学; 上海应用技术学院; 沈阳农业大学; 通辽市农业科学研究院蔬菜
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(21347007,41272255,41472237);国家科技重大专项(2012ZX7505-001)
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通过设计大量引物,探索在植物甲基化引物设计中长、短引物的设计方法及其相应的PCR条件,同时比较不同Taq酶对甲基化率影响。结果表明:17~30 bp短引物适合使用Touch-down程序PCR,但特异性差、成功率低;31~50 bp长引物使用55℃退火60℃延伸的PCR条件成功率最高,其中反向引物的长度及Tm小于正向引物较佳;高保真酶因其3′→5′外切酶活性不宜用于甲基化研究,而Epi TaqTMHS在PCR结果中表现最佳。
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