【摘 要】
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目的 评价重组腺病毒介导肝细胞生长因子(Ad-HGF)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)的转染效率及对干细胞增殖的影响.方法 1只雄性Wistar大鼠,鼠龄4周,体质量约90 g.采用密度梯度离心法结合贴壁法分离培养大鼠BMSC,流式细胞仪进行鉴定;携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒(Ad-GFP)转染BM-SC,探索最佳感染指数(MOI),激光共聚焦显微镜观察转染效果,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比浊法(MTT)测定转染对BMSC增殖的影响;在最佳MOI时Ad-HGF转染BMSC,酶联免疫吸附试验(ELISA
【机 构】
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030032 太原,山西白求恩医院器官移植中心;山西医科大学第二医院心胸外科;山西医科大学第二医院肿瘤生物科
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目的 评价重组腺病毒介导肝细胞生长因子(Ad-HGF)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)的转染效率及对干细胞增殖的影响.方法 1只雄性Wistar大鼠,鼠龄4周,体质量约90 g.采用密度梯度离心法结合贴壁法分离培养大鼠BMSC,流式细胞仪进行鉴定;携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒(Ad-GFP)转染BM-SC,探索最佳感染指数(MOI),激光共聚焦显微镜观察转染效果,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比浊法(MTT)测定转染对BMSC增殖的影响;在最佳MOI时Ad-HGF转染BMSC,酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定人HGF在不同时间的表达.结果 成功培养大鼠BMSC,GFP成功表达,不影响细胞增殖(P>0.05);转染效率随MOI增大逐渐增加,在MOI=200时,效率达88.42％;Ad-HGF成功高效率转染MSC,HGF基因得到持续高表达,48 h时达最高水平.结论 Ad-HGF成功高效率转染大鼠BMSC,外源基因得到持续表达,不影响干细胞活性.
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