砂生槐总生物碱水剂和片剂体外体内抗多房棘球蚴的效果

来源 :中国寄生虫学与寄生虫病杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nyhtstchhgxl
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目的 评价砂生槐总生物碱(TA-SM)水剂和片剂体外体内抗多房棘球蚴的效果。方法 从保种的蒙古长爪沙鼠中分离多房棘球蚴原头节,置培养瓶中(10 000个原头节/瓶)培养。将原头节培养瓶随机分组为培养基对照组、溶剂对照组、阿苯达唑(ABZ)阳性对照组、阿苯达唑亚砜(ABZ-SO)阳性对照组和低、中、高浓度TA-SM水剂组和片剂组,各组分别加RPMI 1640完全培养基、终浓度为0.1%的二甲基亚砜(DMSO)、10μg/ml的ABZ、10.60μg/ml的ABZ-SO或终浓度为5 (低浓度)、10 (中浓度)、20μg/ml (高浓度)的水剂或片剂TA-SM,37℃、5%CO2培养7 d,每天取样台盼蓝染色,倒置显微镜下观察原头节存活情况,计算存活率;共培养至第5天检测培养上清中的碱性磷酸酶(ALP)和原头节中的半胱天冬氨酸蛋白酶3 (caspase 3)的相对表达水平。取54只雌性昆明小鼠,每鼠经腹腔注射0.2 ml多房棘球蚴原头节(密度为10~4个/ml),感染4个月后随机分为生理盐水组、片剂组和水剂组,每组18只,水剂组和片剂组每鼠灌服28 mg/(kg·d)的水剂或片剂TASM,生理盐水组灌服等量的生理盐水,每天给药1次。给药治疗15、30、60 d后,每组随机抽取6只小鼠剖取包囊,称重,计算抑囊率;取肝组织切片,苏木素-伊红(HE)染色后观察肝组织的病理变化,扫描电子显微镜(SEM)观察肝组织的超微结构。组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。结果 体外共培养至第7天,培养基和溶剂对照组的原头节形态呈椭圆形,各部分完整清晰,未受损伤,表现为典型的内陷型;ABZ和ABZ-SO阳性对照组的原头节虫体变长,可见吸盘,表现为典型的外翻型;低、中浓度TA-SM水剂组和片剂组原头节以内陷型为主,偶有外翻型;高浓度TA-SM水剂组和片剂组原头节形态多为外翻型。体外共培养至第7天,低、中、高浓度TA-SM水剂组和片剂组原头节存活率分别为(34.7±2.75)%、(31.5±10.12)%、(27.6±2.51)%和(30.8±4.15)%、(29.8±8.11)%、(25.2±4.30)%,二者存活率差异无统计学意义(t=1.36、0.22、0.83,均P>0.05);TA-SM水剂组和片剂组的存活率均低于培养基对照组[(78.4±9.68)%](F=32.30、38.53,均P <0.01)和溶剂对照组[(82.7±5.45)%](F=55.15、67.50;均P <0.01),与ABZ阳性对照组[(23.85±19.63)%](F=0.53、0.29,均P>0.05)和ABZ-SO阳性对照组[(18.93±3.08)%](F=4.44、3.17;均P>0.05)差异无统计学意义。体外共培养至第5天,低、中、高浓度TA-SM水剂组和片剂组,ABZ和ABZ-SO阳性对照组,培养基和溶剂对照组培养上清中ALP的相对表达水平分别为0.15±0.01、0.17±0.03、0.18±0.03和0.21±0.04、0.29±0.04、0.32±0.04,0.17±0.01和0.15±0.01,0.15±0.01和0.13±0.01,其中TA-SM片剂组均高于培养基和溶剂对照组、ABZ和ABZ-SO阳性对照组(F=18.49、22.34、14.86、18.06,P<0.01)以及TA-SM水剂组(t=6.86、3.78、5.19,均P<0.05)。体外共培养至第5天,低、中、高浓度TA-SM水剂组和片剂组、ABZ和ABZSO阳性对照组,培养基和溶剂对照组原头节中caspase 3的相对表达水平分别为0.14±0.01、0.13±0.01、0.14±0.01和0.21±0.02、0.36±0.04、0.42±0.04,0.10±0.01和0.17±0.01,0.13±0.01和0.10±0.01,其中TA-SM片剂组均高于培养基和溶剂对照组、ABZ和ABZ-SO阳性对照组(F=58.97、69.18、71.81、46.77,均P<0.01)以及TA-SM水剂组(t=4.99、10.24、10.82,P<0.01)。小鼠体内药效实验结果显示,感染多房棘球蚴小鼠治疗60 d后,TA-SM片剂组和水剂组小鼠的抑囊率分别为(24.4±4.15)%、(17.2±3.71)%,二者差异有统计学意义(t=3.15,P<0.05);肝切片HE染色光学显微镜观察结果显示,生理盐水组小鼠肝细胞肿大,周围有大量炎性细胞浸润,细胞质有大量空泡样变性;TA-SM水剂组和片剂组肝细胞形态明显趋于正常,炎性细胞明显减少,细胞质空泡样变性减少;SEM观察结果显示,感染小鼠治疗15 d后,生理盐水组小鼠肝组织病灶中出现典型的囊泡状结构,TA-SM片剂组和水剂组小鼠肝组织病灶中典型的囊泡状结构显著减少。结论 TA-SM水剂和片剂在体内、体外均有一定的抗多房棘球蚴的效果,体外的疗效与ABZ基本一致,TA-SM片剂的疗效优于水剂。
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