【摘 要】
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目的在预测的SED免疫识别活性位点处引入定点突变,构建SED突变体.方法分别设计侧翼引物和突变引物,用megaprimer PCR方法引入突变碱基,将PCR产物与pTrcHis-B质粒连接,转化E.c
【机 构】
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第三军医大学军事预防医学系流行病学教研室,第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所
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目的在预测的SED免疫识别活性位点处引入定点突变,构建SED突变体.方法分别设计侧翼引物和突变引物,用megaprimer PCR方法引入突变碱基,将PCR产物与pTrcHis-B质粒连接,转化E.coli DH5α,用IPlG进行诱导表达,金属螫合亲和层析法纯化,免疫印迹检测纯化的蛋白.结果测序结果表明在相应的位置引入了正确突变,SDS-PAGE和免疫印迹检测结果证实了目的蛋白的表达,将构建成功的突变体分别命名为SEDN23A、SEDN23A/H26R、SEDF45A、SEDL59A、SEDN61A、S
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