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原发性胆汁性肝硬化(PB)是一种以淋巴细胞破坏小叶间胆管的自身免疫性疾病病变多发于中老年妇女患者血清中常常出现抗线粒体(AMA)-M该抗体是PB的血清学标志分析96例PB患者多种自身抗体联合检测结果构成检测PB的自身抗体谱以探讨自身抗体谱在PB诊断和临床应用中的价值。
资料与方法
~1年收治PB患者96例PB诊断标准采用年美国肝病协会(AAD)PB指导建议。其中男1例女86例年龄~86岁平均55±15岁。疾病对照组为其他自身免疫性疾病(AID)1例包括E 5例类风湿关节炎55例干燥综合征()1例其中男15例女85例年龄5~75岁平均5±1岁。健康对照组5名健康体检者其中男名女名年龄~7岁平均55±1岁。
方法:采用免疫印迹法检测人血清中中抗线粒体(AMA)-M亚型抗体、抗肝肾微粒体-1(M-1)抗体、抗肝特异性胞质抗体(-1)、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗体(A/P)。其中AMA-M是PB的血清学标志抗体而抗肝肾微粒体-1(M-1)抗体、抗肝特异性胞质抗体(-1)、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗体(A/P)为肝抗原相关自身抗体可作为诊断自身免疫性肝炎(AIH)的标志抗体从而与PB相鉴别。测定严格按说明书操作取出所需的膜条将其放入温育槽内。膜条上有编号的一面朝上。在温育槽分别加入1.5ml样本缓冲液于室温在摇摆摇床上温育5分钟后吸去温育槽中的液体;在温育槽中分别加入1.5ml已稀释的血清样本在摇摆摇床上室温(18℃~5℃)温育分钟;吸去槽内液体在摇摆摇床上用1.5ml清洗缓冲液清洗膜条次每次5分钟;在温育槽中加入1.5ml已稀释的酶结合物 于摇摆摇床上室温温育分钟;吸去槽内液体在摇摆摇床上用1.5ml清洗缓冲液清洗膜条次每次5分钟。在温育槽中分别加入1.5ml底物液于摇摆摇床上室温(18~5℃)温育1分钟;吸去槽内液体用蒸馏水清洗膜条次每次1分钟。观察特定区域条带有无判定结果检测膜条上无颜色为阴性出现蓝紫色条带为阳性用EUROinecan软件判断结果。
结果
各组血清只能怪自身抗体检测结果比较见表1。
讨论
近年来PB在城市人口中的发病率有增高的趋势。这种趋势可能与人们对疾病认识的加深和诊断技术的提高特别是对自身免疫性肝病相关自身抗体筛选的临床应用有关。从1965年人们首次发现PB患者血清中存在AMA以来该自身抗体已成为诊断PB的主要指标其中AMA-M亚型抗体为PB特异性抗体。
本研究中检测AMA-M的同时还检测了与其他自身免疫性肝病相关的抗M-1抗体、抗-1抗体和A/P抗体。但是在PB患者中未检测到与AIH特异性相关的抗M-1抗体、抗-1抗体和A/P抗体。
总之本实验采用免疫印迹法构成了自身免疫性肝病检测的自身抗体谱操作简便结果判定简单、可靠为PB患者提供了无创性、快速诊断。
参考文献
1Heathcote EJ.Management of primary biliary cirrhosis.The American Association for the tudy of iver Diseases practice guidelines.Hepatology,,1:15-11.
资料与方法
~1年收治PB患者96例PB诊断标准采用年美国肝病协会(AAD)PB指导建议。其中男1例女86例年龄~86岁平均55±15岁。疾病对照组为其他自身免疫性疾病(AID)1例包括E 5例类风湿关节炎55例干燥综合征()1例其中男15例女85例年龄5~75岁平均5±1岁。健康对照组5名健康体检者其中男名女名年龄~7岁平均55±1岁。
方法:采用免疫印迹法检测人血清中中抗线粒体(AMA)-M亚型抗体、抗肝肾微粒体-1(M-1)抗体、抗肝特异性胞质抗体(-1)、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗体(A/P)。其中AMA-M是PB的血清学标志抗体而抗肝肾微粒体-1(M-1)抗体、抗肝特异性胞质抗体(-1)、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗体(A/P)为肝抗原相关自身抗体可作为诊断自身免疫性肝炎(AIH)的标志抗体从而与PB相鉴别。测定严格按说明书操作取出所需的膜条将其放入温育槽内。膜条上有编号的一面朝上。在温育槽分别加入1.5ml样本缓冲液于室温在摇摆摇床上温育5分钟后吸去温育槽中的液体;在温育槽中分别加入1.5ml已稀释的血清样本在摇摆摇床上室温(18℃~5℃)温育分钟;吸去槽内液体在摇摆摇床上用1.5ml清洗缓冲液清洗膜条次每次5分钟;在温育槽中加入1.5ml已稀释的酶结合物 于摇摆摇床上室温温育分钟;吸去槽内液体在摇摆摇床上用1.5ml清洗缓冲液清洗膜条次每次5分钟。在温育槽中分别加入1.5ml底物液于摇摆摇床上室温(18~5℃)温育1分钟;吸去槽内液体用蒸馏水清洗膜条次每次1分钟。观察特定区域条带有无判定结果检测膜条上无颜色为阴性出现蓝紫色条带为阳性用EUROinecan软件判断结果。
结果
各组血清只能怪自身抗体检测结果比较见表1。
讨论
近年来PB在城市人口中的发病率有增高的趋势。这种趋势可能与人们对疾病认识的加深和诊断技术的提高特别是对自身免疫性肝病相关自身抗体筛选的临床应用有关。从1965年人们首次发现PB患者血清中存在AMA以来该自身抗体已成为诊断PB的主要指标其中AMA-M亚型抗体为PB特异性抗体。
本研究中检测AMA-M的同时还检测了与其他自身免疫性肝病相关的抗M-1抗体、抗-1抗体和A/P抗体。但是在PB患者中未检测到与AIH特异性相关的抗M-1抗体、抗-1抗体和A/P抗体。
总之本实验采用免疫印迹法构成了自身免疫性肝病检测的自身抗体谱操作简便结果判定简单、可靠为PB患者提供了无创性、快速诊断。
参考文献
1Heathcote EJ.Management of primary biliary cirrhosis.The American Association for the tudy of iver Diseases practice guidelines.Hepatology,,1:15-11.