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摘要：目的：苦豆子为豆科植物苦豆子Sophora alopecuroides L.的干燥成熟种子，多年生草本，根茎地下芽旱生耐盐植物，固沙抗风作用强，耐干旱，抗风蚀，具有良好的沙生特性.具有清热解毒，止痢的功效。用于咽喉肿痛，肺热咳嗽、乙型病毒性肝炎等，其药用部位为花期的干燥地上部分，称为“苦豆草”；成熟的果实称为“苦豆籽”。自20世纪70年代以来，以苦豆草、苦豆籽为原料提取苦参碱、槐定碱等生物碱，制成了苦参素胶囊、妇炎栓等制剂，开始了苦豆子生物碱系列产品的批量生产。苦豆草始载于《中国药典》1977 年版，但质量标准中只有理化鉴别，随后各版药典均未收载，也未见有关苦豆草药材质量研究的报道，维吾尔医、哈萨克医等民族习用药材，采用适当的实验方法对苦豆子叶药材进行质量标准初步研究。方法：采用鉴别法对它进行外观性状鉴别、显微鉴别、薄层色谱鉴别以及水分、灰分、酸不溶性灰分测定、含量测定等检测项目来控制其质量。科学合理、规范使用，薄层色谱采用硅胶G版，以二氯甲烷-甲醇-丙酮（24：4：1）为展开剂；以苦豆子叶药材为供试品；以苦参碱，氧化苦参碱，槐定碱为对照品。结果：薄层鉴别色谱图显示槐定碱分离效果良好，可用于苦豆子叶药材的质量控制；显微鉴别具有专属性特征。结论：所建的方法准确的进行苦豆子叶定性定性分析，可用于苦豆子叶的鉴别分析。由于时间的关系暂未建立含量测定项目。
关键词：苦豆子叶；薄层色谱法；显微鉴别法；水分；灰分；酸不溶性灰分测定
前言
目前，关于苦豆子药材质量标准研究以及中医、民间医应用方面的知识较多，是新疆阿勒泰地区福海县希望药厂“苦豆子搽剂”制剂中不可缺少的原料。由于苦豆叶在维吾尔、哈萨克医民间中应用比较广泛，采收方法简单，药材资源也丰富，之前并没有进行临床实验以及药理毒性试验等质量控制方面的文字性资料。为此，根据《中华人民共和国药品管理法》等法律法规的规定，《新疆维吾尔自治区维吾尔药材标准》2010年版（第一册）项目研究工作领导小组，在自治区科技攻关项目资金的支持下，依据《中国药典》有关规定，在广泛收集整理地区性习用民族药材品种的基上，组织品种遴选，专家论证，实验研究，起草复核，专家审评，审稿等程序，对它进行，外观性状鉴别、显微鉴别、薄层色谱鉴别以及水分、灰分、酸不溶性灰分测定、含量测定等检测项目来科学合理、规范使用，质量控制的原则进行质量控制研究。阿勒泰地区食品药品检验所副主任中药师巴哈尔古丽主编《哈萨克药志》收载的苦豆叶主治功能中提到：取苦豆子（花期）茎叶部分，置于铺有塑料布的木板上，上面再盖一层塑料布，暴晒，当温度很高时，让患者裸体平躺于上，盖被保暖，反复用使用这样可以治风湿性关节炎。根据苦豆子的化学成分的研究，苦豆子主要含有生物碱，根据报道，苦豆子地上部分含总生物碱约6.11%~8.03%，种子约8.11%。其结构属喹诺里西啶类，供发现了21种生物碱：苦参碱，氧化苦参碱，槐啶碱，氧化槐啶碱，槐果碱等。同时也发现了7中脂肪酸，其中不饱和脂肪酸约占总脂肪酸的88%，也含黄酮类化合物，麦角甾醇，豆甾醇，γ-谷甾醇，全草含挥发油等。生物碱类成分是苦豆子药材的主要成分，其测定方法有薄层色谱法、高效液相色谱法等，本文参考有关文献，采用TLC法对苦豆草药材进行定性鉴别，用高效液相色谱法测定氧化苦参碱和槐定碱的含量，还进行水分，灰分，酸不容灰分测定以及显微鉴别.为药材的质量控制提供了依据。
1.实验材料
1.1实验药品和试剂
苦豆子叶10个批次：
编号 采集地点 采集时间 批号
1 阿勒泰市郊区 2013.05.12 130512
2 切木尔切克镇胡尔尕克托干村 2013.05.15 130515
3 塔城地区托里县 2013.06.01 130601
4 阿勒泰地区布尔津县 2013.06.08 130608
5 阿勒泰地区哈巴河县 2013.06.09 130609
6 阿勒泰市阿拉哈克乡 2013.06.11 130611
7 阿勒泰地区红墩镇 2013.06.13 130613
8 阿勒泰地区富蕴县杜热乡 2013.06.17 130617
9 阿勒泰地区吉木乃县 2013.06.19 130619
10 阿勒泰市拉斯特乡 2013.06.21 130621
1.2主要仪器和设备
超声波仪：SB3200 上海必能信超声有限公司
电子天平：MettlerA200天平 梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司
电阻炉仪：SX-2-9箱式电阻炉 沈阳市电阻炉厂
电热恒温干燥箱：WG-2003台式干燥箱中外合资重庆四达实验仪器有限公司
显微镜型号：OLYMPUS BX51T-32901显微数码摄像系统。
薄层色谱软件数据相机：TLC Visualizer型
紫外分光光度计：UV-2450紫外分光光度计
2.实验方法
【鉴别】
薄层色谱鉴别：取本品0.5g，加浓氨水数滴使其湿润后加三氯甲烷20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液另取苦参碱，氧化苦参碱，槐定碱对照品，加甲醇制成每1ml各含0.2mg的溶液
作为对照品溶液，照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录VIB）试验。
显微鉴别（粉末）：供试品粉末少许置载玻片上，滴加水可检出气孔等细胞；甘油醋酸试液，水合氯醛试液或其他适宜的试液盖上盖玻片，必要时，按上法加热透化。粉末观察时，一般用甘油醋酸装置以观察淀粉粒在内的显微鉴别特征。水合氯醛试液能渗透组织，使皱缩的细胞膨胀并能溶解淀粉粒，蛋白质，树脂，挥发油和叶绿素等，使细胞组织变得透明而清晰。所有粉末特征图，都是用顯微描绘器将粉末中观察所得的特征，按一定放大倍数加以描绘，文图对照，便于利用。
【检查】
水溶性浸出物测定（冷浸法）：取供试品约4g，精密称定，置250ml锥形瓶中，精密加水100ml，密塞，冷浸，前6个小时内时时振摇，再静止18h，用滤纸滤过，精密量取续滤液20ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器冷却30min，称定重量，计算%。
水分测定法（烘干法）：取供试品2～5g，平铺于干燥至恒重的扁形称量平中，厚度不超过5mm，疏松供试品不超过10mm，精密称定，打开瓶盖在100～105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30分钟，精密称定，在再上述温度干燥一小时，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止，根据减失的重量，计算供试品中含水量（%）.
灰分测定法
总灰分测定法：测定用的供试品须粉碎，使能通过2号筛，混合均匀后，取供试品2～3g，置炽灼恒重的坩埚中，称定重量，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全碳化时逐渐升高温度至500～600℃，使完全灰化并至恒重，根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（%）。
酸不溶灰分测定法：取上项所得的灰分，在坩埚中小心加入稀盐酸约10ml，用表面皿覆盖坩埚，置水浴上加热10分钟，表面皿用热水5ml冲洗洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应为止，滤渣连同滤纸移置同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重。根据残渣重量，计算供试品中酸不溶灰分的含量（%）
3.实验结果
【性状】呈长卵形，长：1-4cm，宽：0.4-2cm，先端钝，基部渐狭，全缘，上表面绿色，下表面灰绿色，两端具有被毛，叶脉灰褐色，稍隆起，质脆，易折断，气微弱而特异，叶微苦。
显微镜下观察苦豆子叶的正面与背面图如下：
图1 苦豆子叶正面图：绿色，叶面被梳毛，叶缘被密毛，黑色腺点及叶脉
圖2 苦豆子叶背面图：密被毛，具灰褐色网状叶脉
2【鉴别】
2.1薄层鉴别：为苦豆子叶成分的薄层色谱鉴定，以苦豆子叶为供试品；以苦参碱，氧化苦参碱，槐定碱为对照品。对照品薄层色谱结果见图。根据3批的实验结果拟定薄层色谱鉴别方法。
供试品溶液的制备 取本品0.5g，加浓氨水数滴使其湿润，加三氯甲烷20ml，加盖，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液另取苦参碱展开剂和溶剂的考察：乙酸乙酯-异丙酮-浓氨-水（25：15：5：1）为展开剂结果比较稳定，薄层现象稳定。
对照品溶液的制备 取苦参碱，氧化苦参碱，槐定碱对照品加甲醇制成1mg/ml的对照品。
2.2显微鉴别：为本品粉末显微鉴别描述，苦豆子药材本身就有显的专属性鉴别特征，如不定式气孔，不定式气孔是在粗粉制片观察时观察到的，因为细分制作片子，有些细胞会被破坏，不利于观察鉴别特征，所以使用粗粉观察较好。经过多次试验，水合氯醛，甘油醋酸，水制片所观察到的粉末特图大致相同，这三种条件下，都可以观察到非腺毛，腺毛，导管，气孔等叶子细胞所有的特征，
药材粉末显微特征图片
气孔 螺纹导管 腺毛
油滴 薄壁细胞 纤维
浸出物测定
经过反复实验，水溶性浸出冷浸法比较稳定，故采用此方法来进行浸出物测定。
水溶性浸出冷浸法结果：
编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 平均值
浸出物（%） 41.39 38.71 41.33 40.29 37.83 38.22 33.77 38.58 32.79 31.61 37.75
水分测定
编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 平均值
水分（%） 6.46 7.66 6.50 6.38 6.41 7.59 7.05 7.43 7.22 8.82 7.15
灰分及酸不溶性灰分测定
编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 平均值
灰分（%） 6.48 6.51 6.58 6.78 6.85 6.10 6.54 6.70 6.68 5.31 6.45
酸不溶性灰分（%） 0.45 0.35 0.07 0.22 0.36 0.28 0.31 0.37 0.29 0.33 0.30
试验讨论
近年来对苦豆子的研究逐渐增多，研究表明苦豆子地上部分含生物碱在6.1%-8.03%，种子约含生物碱8.11%。苦豆子生物碱具有良好的生物活性，被广泛应用临床，其不仅具有抗癌，抑癌，抑制和杀灭各种微生物的药理活性，而且对免疫系统，心血管系统有广泛的药理作用。
本实验通过各种鉴别方法对苦豆子叶药材进行了质量标准的初步研究，苦豆子为中国植物图谱数据库收录的有毒植物，其毒性为全草有毒，牲畜常饮饥饿贪食，轻者消化不良，重者痉挛，食入牲畜体重2%的苦豆子本植物即能引起死亡，解毒按生物碱中毒解救，粉碎药材时要戴口罩，避免中毒。
参考文献：
[1]徐新，巴哈尔古丽.哈萨克药志[M].第一卷.乌鲁木齐：民族出版社，2009：119-121.
[2]巴哈尔古丽等 时珍国医国药编委会，《时珍国医国药》2008年第19卷 总第152期.
[3]程永杰等 HPLC法测定祛风息痛丸中瑞香素的含量 山西医科大学学报2007，12月，38（12）
[4]高剑峰，蒋建军，潘晓亮. 苦豆子生物碱总的成份分析及提取工艺的研究［J］． 石河子大学学报：自然科学版，1997，1
关键词：苦豆子叶；薄层色谱法；显微鉴别法；水分；灰分；酸不溶性灰分测定
前言
目前，关于苦豆子药材质量标准研究以及中医、民间医应用方面的知识较多，是新疆阿勒泰地区福海县希望药厂“苦豆子搽剂”制剂中不可缺少的原料。由于苦豆叶在维吾尔、哈萨克医民间中应用比较广泛，采收方法简单，药材资源也丰富，之前并没有进行临床实验以及药理毒性试验等质量控制方面的文字性资料。为此，根据《中华人民共和国药品管理法》等法律法规的规定，《新疆维吾尔自治区维吾尔药材标准》2010年版（第一册）项目研究工作领导小组，在自治区科技攻关项目资金的支持下，依据《中国药典》有关规定，在广泛收集整理地区性习用民族药材品种的基上，组织品种遴选，专家论证，实验研究，起草复核，专家审评，审稿等程序，对它进行，外观性状鉴别、显微鉴别、薄层色谱鉴别以及水分、灰分、酸不溶性灰分测定、含量测定等检测项目来科学合理、规范使用，质量控制的原则进行质量控制研究。阿勒泰地区食品药品检验所副主任中药师巴哈尔古丽主编《哈萨克药志》收载的苦豆叶主治功能中提到：取苦豆子（花期）茎叶部分，置于铺有塑料布的木板上，上面再盖一层塑料布，暴晒，当温度很高时，让患者裸体平躺于上，盖被保暖，反复用使用这样可以治风湿性关节炎。根据苦豆子的化学成分的研究，苦豆子主要含有生物碱，根据报道，苦豆子地上部分含总生物碱约6.11%~8.03%，种子约8.11%。其结构属喹诺里西啶类，供发现了21种生物碱：苦参碱，氧化苦参碱，槐啶碱，氧化槐啶碱，槐果碱等。同时也发现了7中脂肪酸，其中不饱和脂肪酸约占总脂肪酸的88%，也含黄酮类化合物，麦角甾醇，豆甾醇，γ-谷甾醇，全草含挥发油等。生物碱类成分是苦豆子药材的主要成分，其测定方法有薄层色谱法、高效液相色谱法等，本文参考有关文献，采用TLC法对苦豆草药材进行定性鉴别，用高效液相色谱法测定氧化苦参碱和槐定碱的含量，还进行水分，灰分，酸不容灰分测定以及显微鉴别.为药材的质量控制提供了依据。
1.实验材料
1.1实验药品和试剂
苦豆子叶10个批次：
编号 采集地点 采集时间 批号
1 阿勒泰市郊区 2013.05.12 130512
2 切木尔切克镇胡尔尕克托干村 2013.05.15 130515
3 塔城地区托里县 2013.06.01 130601
4 阿勒泰地区布尔津县 2013.06.08 130608
5 阿勒泰地区哈巴河县 2013.06.09 130609
6 阿勒泰市阿拉哈克乡 2013.06.11 130611
7 阿勒泰地区红墩镇 2013.06.13 130613
8 阿勒泰地区富蕴县杜热乡 2013.06.17 130617
9 阿勒泰地区吉木乃县 2013.06.19 130619
10 阿勒泰市拉斯特乡 2013.06.21 130621
1.2主要仪器和设备
超声波仪：SB3200 上海必能信超声有限公司
电子天平：MettlerA200天平 梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司
电阻炉仪：SX-2-9箱式电阻炉 沈阳市电阻炉厂
电热恒温干燥箱：WG-2003台式干燥箱中外合资重庆四达实验仪器有限公司
显微镜型号：OLYMPUS BX51T-32901显微数码摄像系统。
薄层色谱软件数据相机：TLC Visualizer型
紫外分光光度计：UV-2450紫外分光光度计
2.实验方法
【鉴别】
薄层色谱鉴别：取本品0.5g，加浓氨水数滴使其湿润后加三氯甲烷20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液另取苦参碱，氧化苦参碱，槐定碱对照品，加甲醇制成每1ml各含0.2mg的溶液
作为对照品溶液，照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录VIB）试验。
显微鉴别（粉末）：供试品粉末少许置载玻片上，滴加水可检出气孔等细胞；甘油醋酸试液，水合氯醛试液或其他适宜的试液盖上盖玻片，必要时，按上法加热透化。粉末观察时，一般用甘油醋酸装置以观察淀粉粒在内的显微鉴别特征。水合氯醛试液能渗透组织，使皱缩的细胞膨胀并能溶解淀粉粒，蛋白质，树脂，挥发油和叶绿素等，使细胞组织变得透明而清晰。所有粉末特征图，都是用顯微描绘器将粉末中观察所得的特征，按一定放大倍数加以描绘，文图对照，便于利用。
【检查】
水溶性浸出物测定（冷浸法）：取供试品约4g，精密称定，置250ml锥形瓶中，精密加水100ml，密塞，冷浸，前6个小时内时时振摇，再静止18h，用滤纸滤过，精密量取续滤液20ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器冷却30min，称定重量，计算%。
水分测定法（烘干法）：取供试品2～5g，平铺于干燥至恒重的扁形称量平中，厚度不超过5mm，疏松供试品不超过10mm，精密称定，打开瓶盖在100～105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30分钟，精密称定，在再上述温度干燥一小时，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止，根据减失的重量，计算供试品中含水量（%）.
灰分测定法
总灰分测定法：测定用的供试品须粉碎，使能通过2号筛，混合均匀后，取供试品2～3g，置炽灼恒重的坩埚中，称定重量，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全碳化时逐渐升高温度至500～600℃，使完全灰化并至恒重，根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（%）。
酸不溶灰分测定法：取上项所得的灰分，在坩埚中小心加入稀盐酸约10ml，用表面皿覆盖坩埚，置水浴上加热10分钟，表面皿用热水5ml冲洗洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应为止，滤渣连同滤纸移置同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重。根据残渣重量，计算供试品中酸不溶灰分的含量（%）
3.实验结果
【性状】呈长卵形，长：1-4cm，宽：0.4-2cm，先端钝，基部渐狭，全缘，上表面绿色，下表面灰绿色，两端具有被毛，叶脉灰褐色，稍隆起，质脆，易折断，气微弱而特异，叶微苦。
显微镜下观察苦豆子叶的正面与背面图如下：
图1 苦豆子叶正面图：绿色，叶面被梳毛，叶缘被密毛，黑色腺点及叶脉
圖2 苦豆子叶背面图：密被毛，具灰褐色网状叶脉
2【鉴别】
2.1薄层鉴别：为苦豆子叶成分的薄层色谱鉴定，以苦豆子叶为供试品；以苦参碱，氧化苦参碱，槐定碱为对照品。对照品薄层色谱结果见图。根据3批的实验结果拟定薄层色谱鉴别方法。
供试品溶液的制备 取本品0.5g，加浓氨水数滴使其湿润，加三氯甲烷20ml，加盖，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液另取苦参碱展开剂和溶剂的考察：乙酸乙酯-异丙酮-浓氨-水（25：15：5：1）为展开剂结果比较稳定，薄层现象稳定。
对照品溶液的制备 取苦参碱，氧化苦参碱，槐定碱对照品加甲醇制成1mg/ml的对照品。
2.2显微鉴别：为本品粉末显微鉴别描述，苦豆子药材本身就有显的专属性鉴别特征，如不定式气孔，不定式气孔是在粗粉制片观察时观察到的，因为细分制作片子，有些细胞会被破坏，不利于观察鉴别特征，所以使用粗粉观察较好。经过多次试验，水合氯醛，甘油醋酸，水制片所观察到的粉末特图大致相同，这三种条件下，都可以观察到非腺毛，腺毛，导管，气孔等叶子细胞所有的特征，
药材粉末显微特征图片
气孔 螺纹导管 腺毛
油滴 薄壁细胞 纤维
浸出物测定
经过反复实验，水溶性浸出冷浸法比较稳定，故采用此方法来进行浸出物测定。
水溶性浸出冷浸法结果：
编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 平均值
浸出物（%） 41.39 38.71 41.33 40.29 37.83 38.22 33.77 38.58 32.79 31.61 37.75
水分测定
编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 平均值
水分（%） 6.46 7.66 6.50 6.38 6.41 7.59 7.05 7.43 7.22 8.82 7.15
灰分及酸不溶性灰分测定
编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 平均值
灰分（%） 6.48 6.51 6.58 6.78 6.85 6.10 6.54 6.70 6.68 5.31 6.45
酸不溶性灰分（%） 0.45 0.35 0.07 0.22 0.36 0.28 0.31 0.37 0.29 0.33 0.30
试验讨论
近年来对苦豆子的研究逐渐增多，研究表明苦豆子地上部分含生物碱在6.1%-8.03%，种子约含生物碱8.11%。苦豆子生物碱具有良好的生物活性，被广泛应用临床，其不仅具有抗癌，抑癌，抑制和杀灭各种微生物的药理活性，而且对免疫系统，心血管系统有广泛的药理作用。
本实验通过各种鉴别方法对苦豆子叶药材进行了质量标准的初步研究，苦豆子为中国植物图谱数据库收录的有毒植物，其毒性为全草有毒，牲畜常饮饥饿贪食，轻者消化不良，重者痉挛，食入牲畜体重2%的苦豆子本植物即能引起死亡，解毒按生物碱中毒解救，粉碎药材时要戴口罩，避免中毒。
参考文献：
[1]徐新，巴哈尔古丽.哈萨克药志[M].第一卷.乌鲁木齐：民族出版社，2009：119-121.
[2]巴哈尔古丽等 时珍国医国药编委会，《时珍国医国药》2008年第19卷 总第152期.
[3]程永杰等 HPLC法测定祛风息痛丸中瑞香素的含量 山西医科大学学报2007，12月，38（12）
[4]高剑峰，蒋建军，潘晓亮. 苦豆子生物碱总的成份分析及提取工艺的研究［J］． 石河子大学学报：自然科学版，1997，1