目的 探讨核苷酸还原酶小亚基(RRM2)反义寡核苷酸(ASODN)对人绒毛膜癌细胞株JAR细胞体外生长的影响.方法以脂质体为载体,将人工合成的分别位于RRM2 mRNA核苷酸序列第626～645(编码区)和第1572～1591 ( 3′端非编码区) 位点且全程硫代修饰的两条ASODN片断(前者称ASODN1,后者称ASODN2)导入JAR细胞中,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,免疫印迹法和RT-PCR技术检测ASODN对RRM2蛋白和mRNA表达的影响.结果 (1)ASODN1对JAR细胞的抑制作用呈剂量和时间效应:100 nmol/L ASODN1作用后JAR细胞的生长抑制率为(8.10±1.18)%;随着ASODN1浓度的增加细胞生长抑制作用增强,ASODN1浓度为400 nmol/L时其细胞生长抑制率为(27.70±3.68)%,与ASODN1浓度为0时[(0.16±0.12)%]比较,差异有极显著性(P=0.000).200 nmol/L ASODN1作用24 h后,细胞生长抑制率为(13.98±1.45)%; 48 h[为(18.90±4.85)%]达到高峰,72 h抑制作用[为(19.53±5.00)%]不再明显增强,分别与作用时间为0时[(0.16±0.31)%]比较,差异均有极显著性(P＝0.000).(2)JAR细胞RRM2蛋白和mRNA的表达:200 nmol/L ASODN1作用12 h, RRM2蛋白和mRNA表达水平开始下降;作用24 h,细胞RRM2蛋白和mRNA表达下降更明显;作用48 h, RRM2蛋白和mRNA表达达最低水平,与作用时间也为48 h,但未加药者比较,差异有显著性(P<0.05);72 h有所恢复.ASODN2和对照寡核苷酸(即与ASODN1核苷酸组成一样但序列打乱的寡核苷酸类似物)对JAR细胞增殖及RRM2蛋白和mRNA的表达无明显影响,但ASODN2与ASODN1联合应用,对JAR细胞生长的抑制作用和对RRM2蛋白和mRNA表达的下调作用显著强于单用ASODN1(P<0.05).结论 ASOND1具有选择性和特异性抑制JAR细胞生长和RRM2的转录和翻译.联合应用针对RRM2基因不同位点的ASODN是提高反义药物作用的重要方法之一。