【摘 要】
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【目的】卵泡发育是一个复杂的调控过程，其中绵羊卵泡颗粒细胞（granulosa cells, GCs）的增殖，分化会直接影响卵泡的发育状况。TGF-β信号通路在绵羊卵巢发育和卵泡生长过程中起着重要作用，Smad7作为TGF-β信号通路关键性的抑制基因也发挥重要作用，通过探究Smad7介导TGF-β信号通路对绵羊卵泡GCs增殖凋亡的影响，为进一步研究Smad7在卵泡GCs增殖凋亡过程中的调控作用提供
【基金项目】
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山西省基础研究计划（20210302123393）； 山西省现代农业产业技术体系建设专项资金； 大同市重点研发计划（农业,2021027）；
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【目的】卵泡发育是一个复杂的调控过程，其中绵羊卵泡颗粒细胞（granulosa cells, GCs）的增殖，分化会直接影响卵泡的发育状况。TGF-β信号通路在绵羊卵巢发育和卵泡生长过程中起着重要作用，Smad7作为TGF-β信号通路关键性的抑制基因也发挥重要作用，通过探究Smad7介导TGF-β信号通路对绵羊卵泡GCs增殖凋亡的影响，为进一步研究Smad7在卵泡GCs增殖凋亡过程中的调控作用提供依据。【方法】选取4—6月龄未怀孕的晋中健康杜湖杂交母羊20只，屠宰后采集双侧卵巢组织，分离培养卵泡颗粒细胞，FSHR细胞免疫荧光鉴定，Smad7细胞免疫荧光的表达定位，CCK8法测定细胞增殖情况，绘制生长曲线；细胞传代后外源添加不同浓度Smad7激动剂积雪草苷（asiaticoside,AS）（0、100、200、400、600 ng·mL-1）培养绵羊卵泡GCs，选择AS最佳作用浓度处理二代颗粒细胞，采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测TGF-β信号通路中关键基因及细胞凋亡和周期相关基因表达水平；合成3个siSmad7，转染至卵泡GCs中，选择干扰效果最佳的，采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测TGF-β信号通路中关键基因及细胞凋亡和周期相关基因表达水平。【结果】Smad7在绵羊卵泡GCs中有表达；200 ng·mL-1 AS能极显著上调Smad7在GCs的表达（P ＜0.01）,siSmad7-1对绵羊卵泡GCs的转染效果最佳（P＜0.01）;Smad7上调能显著增加TGF-β信号通路Smad4,TFDP-1和EP300的表达量（P＜0.05），极显著增加TGF-β信号通路SP1的表达（P＜0.01），显著增加凋亡相关基因Caspase8的表达量（P＜0.05），极显著增加凋亡相关基因Caspase3和Bim的表达量（P＜0.01），显著升高细胞周期相关基因P21和P27的表达量（P＜0.05），极显著升高细胞周期相关基因CCND2的表达量（P＜0.01），而CCND1的表达量显著降低（P＜0.05）;Smad7 siRNA显著降低TGF-β信号通路Smad4,TFDP-1和EP300的表达量（P＜0.05），极显著降低TGF-β信号通路SP1的表达量（P＜0.01），显著降低凋亡相关基因Caspase8的表达量（P＜0.05），极显著降低凋亡相关基因Caspase3和Bim的表达量（P＜0.01），极显著降低细胞周期相关基因P21,P27和CCND2的表达量（P＜0.01），极显著升高CCND1的表达量（P＜0.01）;CCK8分析显示，Smad7上调，GCs的增殖率在24和48 h显著下调（P＜0.01）,Smad7 siRNA在24和72 h显著升高GCs的增殖率（P＜0.05），在48 h极显著升高GCs的增殖率（P＜0.01）。【结论】Smad7介导TGF-β信号通路抑制绵羊卵泡GCs增殖和促进细胞凋亡。
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