【摘 要】
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目的寻找一种效果更好的冻存液,进一步提高冻存肝细胞的活率和活性.方法用体重5～8 kg健康杂种乳猪作为肝细胞供体,用胶原酶原位灌注法分离肝细胞,将肝细胞分别以三种不同的冻
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目的寻找一种效果更好的冻存液,进一步提高冻存肝细胞的活率和活性.方法用体重5～8 kg健康杂种乳猪作为肝细胞供体,用胶原酶原位灌注法分离肝细胞,将肝细胞分别以三种不同的冻存液(二甲基亚砜、二甲基亚砜+羟乙基淀粉、二甲基亚砜+羟乙基淀粉+1.3 mmol/L 氯化钙)在液氮中冷冻保存1个月.1个月后快速复温肝细胞,做活率、活性和形态学检测,部分肝细胞在含Ca2+和不含Ca2+两种不同的培养液里培养5 d,并观察其功能表达情况.结果不同冻存液保存的猪肝细胞其活率、活性和形态学表现均有所不同,其中单用DMSO(二甲基亚砜)的冷冻液效果最差;其次是HES(羟乙基淀粉)+DMSO组;HES+DMSO+1.3 mmol/L Cacl2联合冷冻液效果最好.复温后在含Ca2+培养液里培养的肝细胞其活率和白蛋白浓度比不含Ca2+的明显要好.结论 HES+DMSO+1.3 mmol/L Cacl2联合冷冻液显著提高了肝细胞的冻存质量.
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