观察二氢青蒿素(DHA)和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)联合用药抑制膀胱癌T24细胞增殖并探讨其机制。
方法采用不同浓度(0、12.5、25.0、50.0、100.0 μmol/L)的DHA及加入自噬抑制剂3-MA(5 mmol/L)分别处理膀胱癌T24细胞24、48、72 h后，通过噻唑蓝(MTT)实验分析细胞存活率，流式细胞术测定细胞凋亡，Western blot检测凋亡标记蛋白半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3酶原(procaspase-3)、多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(t-PARP)和多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶降解产物(cleaved-PARP)的表达水平。50.0 μmol/L DHA作用于膀胱癌T24细胞24 h后，丹酰戊二胺(MDC)染色后采用荧光显微镜对自噬进行形态观察，透射电子显微镜观察自噬体超微结构，Western blot检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin-1和p62的表达。
结果DHA抑制膀胱癌T24细胞的增殖并诱导其凋亡，作用呈浓度和时间依赖性(12.5 μmol/L的DHA 24、48、72 h抑制率依次是5.79%、6.61%、11.09%；25.0 μmol/L的DHA 24、48、72 h抑制率依次是11.25%、15.32%、21.35%；50.0 μmol/L的DHA 24、48、72 h抑制率依次是27.16%、30.66%、47.58%；100.0 μmol/L的DHA 24、48、72 h抑制率依次是41.52%、57.52%、74.29%；12.5 μmol/L的DHA 24、48、72 h死亡率依次是3.66%、6.44%、9.78%；25.0 μmol/L的DHA 24、48、72 h死亡率依次是7.02%、13.40%、17.55%；50.0 μmol/L的DHA 24、48、72 h死亡率依次是20.53%、26.97%、38.69%；100.0 μmol/L的DHA 24、48、72 h死亡率依次是29.82%、39.26%、44.92%)，与空白对照组比较差异有统计学意义(P＝0.003)；与空白对照组、3-MA和DHA单药组比较，自噬抑制剂3-MA和DHA联合用药可增加膀胱癌细胞的凋亡率。荧光显微镜下观察到MDC荧光染色阳性的自噬泡呈点状结构分布在细胞核的胞质内。透射电子显微镜下观察到多个双层膜包裹胞质形成的自噬体。DHA处理膀胱癌T24细胞后，自噬相关蛋白LC3、Beclin-1及凋亡标记蛋白cleaved-PARP的表达量增加，而自噬相关蛋白p62和凋亡标记蛋白procaspase-3、t-PARP表达水平降低；加入自噬抑制剂3-MA后，与对照组比较，cleaved-PARP的表达量增加及procaspase-3、t-PARP表达水平降低这一趋势更加明显。
结论DHA可抑制膀胱癌细胞的增殖并诱导其凋亡及产生自噬现象，且自噬在细胞凋亡过程中对癌细胞起保护性作用。