【摘 要】
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[背景]非小细胞肺癌(NSCLC)是严重危害人类健康的恶性肿瘤,长链非编码RNA(lncRNA)可能在其发生发展中发挥重要作用.[目的]探讨lncRNA BRE-AS1在NSCLC中的表达、生物学功能和
【机 构】
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东南大学公共卫生学院,江苏 南京 210000;东南大学环境医学工程教育部重点实验室,江苏 南京 210000;江苏省泰州市疾病预防控制中心环境职业卫生科,江苏 泰州 225300
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[背景]非小细胞肺癌(NSCLC)是严重危害人类健康的恶性肿瘤,长链非编码RNA(lncRNA)可能在其发生发展中发挥重要作用.[目的]探讨lncRNA BRE-AS1在NSCLC中的表达、生物学功能和调控作用,为进一步了解NSCLC发病机制提供理论依据.[方法]利用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)技术对91例来自南京胸科医院的原发性NSCLC患者的癌组织和癌旁组织以及NSCLC细胞中BRE-AS1表达水平进行检测,应用TCGA RNASeqV2系统分析TCGA数据库中BRE-AS1在1016例NSCLC组织和110例正常组织中的表达水平.应用受试者工作特征(ROC)曲线评价BRE-AS1对NSCLC的诊断价值,应用t检验分析不同临床特征NSCLC患者的BRE-AS1表达水平.采用慢病毒转染在NSCLC细胞A549中构建BRE-AS1过表达稳转细胞株,分别以CCK8法和流式细胞术检测BRE-AS1对细胞增殖、周期及凋亡的影响.通过功能富集分析BRE-AS1的下游信号通路并用Western blotting法检测信号通路中关键蛋白表达水平.[结果]RT-qPCR和TCGA数据库分析结果显示BRE-AS1在NSCLC组织[RT-qPCR:差异表达倍数(FC)=-13.15,TCGA:FC=-4.85,P<0.05]和NSCLC细胞A549(FC=-4.87,P<0.05)中表达下调.ROC分析结果显示BRE-AS1对NSCLC具有较强的诊断能力(NSCLC组织:曲线下面积为0.916,95％CI:0.872～0.960;TCGA数据库:曲线下面积为0.853,95％CI:0.809～0.897).CCK8结果显示,在A549细胞中过表达BRE-AS1后,细胞增殖能力在24、36、48 h降低(P<0.01);同时流式细胞术分析显示,过表达BRE-AS1阻滞A549细胞周期于G2/M期,并诱导细胞凋亡率上升(P<0.05).功能富集分析发现,磷酸肌醇3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B(AKT)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路与NSCLC发生发展相关(P<0.05),进一步Western blotting法分析发现,过表达BRE-AS1后,A549细胞中AKT3、p-AKT3、mTOR、p-mTOR表达以及p-AKT3/AKT3、p-mTOR/mTOR均下降,PTEN表达上升,提示过表达BRE-AS1可抑制A549细胞中PI3K-AKT-mTOR信号通路.[结论]BRE-AS1在NSCLC中表达下调,具有较高诊断价值.BRE-AS1可能通过抑制PI3K-AKT-mTOR信号传导途径降低A549细胞生长活力,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,进而影响NSCLC发生发展.
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