目的 研究发夹状小分子干扰RNA(small RNA interference,siRNA)对白血病多药耐药细胞株K562/A02多药耐药基因(mdr1)和谷胱甘肽S-转移酶(GSTπ)基因功能的影响.方法以mdr1 mRNA第79～99和GSTπ mRNA第308～327核苷酸为作用靶点,合成针对靶区域序列的发夹状siRNA,克隆人pSilencer2.1-U6 neo,克隆产物为pSilence mdr1和pSilence GSTπ,转染K562/A02细胞株.用Western blot和荧光免疫组化法观察P糖蛋白(P-gp)和GSTπ蛋白的表达;MTT法检测阿霉素对K562/A02细胞半数抑制浓度(IC50).结果Western blot检测显示转染pSilence mdr1和pSilenceGSTπ的K562/A02细胞株与K562/A02细胞对照组相比,P-gp和GSTπ的表达明显下降,分别从0.75±0.02和0.54±0.02下降到0.48±0.05和0.39±0.02(P值均＜0.01),α-微管蛋白的表达没有变化;转染pSilence核纤层蛋白A/C的K562/A02细胞株与对照组相比,核纤层蛋白A/C表达明显下降,但P-gp和GSTπ的表达不变;荧光免疫组化显示P-gp和GSTπ阳性细胞比例从转染前的(71.25±9.65)%和(81.25±6.49)%下降到转染后的(35.25±5.97)%和(41.25 ±4.43)%(P值均＜0.01);转染空载体后K562/A02细胞对阿霉素的耐药指数为23,转染pSilence mdr1和pSilence GSTπ后分别下降为8和10,差异有统计学意义(P＜0.01).结论siRNA可有效、特异地逆转K562/A02细胞株mdr1和GSTπ的多药耐药性。
发夹状siRNA逆转白血病K562/A02细胞株mdr1和GSTπ功能的研究
【摘 要】
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目的 研究发夹状小分子干扰RNA(small RNA interference,siRNA)对白血病多药耐药细胞株K562/A02多药耐药基因(mdr1)和谷胱甘肽S-转移酶(GSTπ)基因功能的影响.方法以mdr1 mRNA第79～99和GSTπ mRNA第308～327核苷酸为作用靶点,合成针对靶区域序列的发夹状siRNA,克隆人pSilencer2.1-U6 neo,克隆产物为pSilenc
【机 构】
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200040,上海,复旦大学附属华山医院血液科,华山医院检验医学中心,200040,上海,复旦大学附属华山医院血液科,华山医院检验医学中心,200040,上海,复旦大学附属华山医院血液科
【出 处】
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中华血液学杂志
【发表日期】
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2006年27期
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