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目的：研究大鼠阴道黏膜上皮细胞（RVECs）体外培养的影响因素,探索建立RVECs稳定的体外分离培养方法。方法：比较大鼠动情周期、DispaseⅡ配制方法、Dis-paseⅡ浓度、胰酶消化法及培养基对RVECs体外培养的影响。结果：动情前期的大鼠阴道上皮层更厚,消化后可获得更多RVECs;上皮层用D-KSFM配制的DispaseⅡ消化后能很好的贴壁,用PBS配制的DispaseⅡ消化后细胞贴壁欠佳;1.2U/ml DispaseⅡ的分离效果优于0.6U/ml DispaseⅡ;三步胰酶消化法比一步胰酶消化