【摘 要】
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目的:通过293T真核细胞表达犬瘟热病毒融合蛋白,并鉴定其抗原性。方法:利用PCR方法扩增犬瘟热病毒(Onderstepoort株)的融合蛋白胞外段,在C末端引入氨基酸突变和His标签,插入p
【机 构】
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天津科技大学生物工程学院,中国科学院天津工业生物技术研究所
【基金项目】
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国家重点研发计划“生物安全高效应对产品研发技术体系研究”专项中的“新发突发烈性传染病治疗抗体的研制与制备技术”项目(2018YFC1200603)
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目的:通过293T真核细胞表达犬瘟热病毒融合蛋白,并鉴定其抗原性。方法:利用PCR方法扩增犬瘟热病毒(Onderstepoort株)的融合蛋白胞外段,在C末端引入氨基酸突变和His标签,插入pFuse载体,构建重组质粒pFuse-CDV-sF-ecto。将重组质粒转染293T细胞,72~96h后收上清,通过镍离子亲和层析和凝胶层析纯化目的蛋白,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定sF-ecto蛋白抗原性。结果 :细胞上清先经His-TrapTM富集,而后用Superdex 200 10/300GL纯化,
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