麒麟鸡miRNA-1623与靶基因Wnt4的靶标验证分析

来源 :基因组学与应用生物学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fei5051484
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麒麟鸡(frizzle chicken)是我国亚热带地区特有的一种具有卷羽特性的优质肉鸡品种。本课题组前期研究发现在麒麟鸡皮肤中高度表达miRNA-1623(miR-1623),因此推测其参与麒麟鸡毛囊发育及卷羽的形成过程。为研究其独特的毛囊发育及卷羽散热机制,本研究利用生物信息学手段根据其靶标结合位点寻找到其潜在靶标Wnt4基因,并利用qRT-PCR对卷羽麒麟鸡和片羽怀乡鸡中的miR-1623与Wnt4的表达水平进行了检测。进一步通过构建双荧光素酶报告基因pmirGlo载体在细胞水平对miR-1623与Wnt4的靶标关系进行了验证。结果表明:Wnt4 mRNA的3’UTR存在miR-1623靶标结合位点(TGCCTG);相对于怀乡鸡,麒麟鸡皮肤中miR-1623表达水平显著升高(p<0.01),Wnt4 mRNA表达水平显著降低(p<0.01);双荧光素酶检测分析发现miR-1623靶向负调控Wnt4-3’UTR。本实验可为进一步揭示miRNA-1623在禽类毛囊生长发育过程中的作用提供参考。
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