【摘 要】
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对广藿香的法尼基焦磷酸酶(PatFPPS)进行重组蛋白的原核表达,并筛选与之互相作用的蛋白。利用PCR扩增PatFPPS编码区并连接到pGEX-6P-1表达载体,测序验证后将质粒转化BL21(DE3
【机 构】
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广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室（广州中医药大学）国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(81803657),广东省教育厅青年创新人才类项目(2017KQNCX039),广东省中医药局科技项目(20181075),广东省教育厅重点提升平台建设项目—岭南中药资源教育部重点实验室(2014KTSPT016)
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对广藿香的法尼基焦磷酸酶(PatFPPS)进行重组蛋白的原核表达,并筛选与之互相作用的蛋白。利用PCR扩增PatFPPS编码区并连接到pGEX-6P-1表达载体,测序验证后将质粒转化BL21(DE3)表达菌株,并用IPTG诱导表达蛋白,最终得到带有GST标签的PatFPPS融合蛋白。利用GST Pull-Down技术,将GST-PatFPPS融合蛋白分别与广藿香叶片总蛋白进行体外孵育,洗脱得到蛋白复合物,经SDS-PAGE及LC-MS/MS鉴定。结果表明,PatFPPS原核表达体系成功建立,获得纯化重组蛋
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一达到目的就是成功，达不到目的就是失败。二你可以征服高山大海，但你很难改变长辈的思想，除非你是一个大成功者。三凡是成功者，至少有一个大优点。凡是失败者，至少有一个大缺点。