【摘 要】
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目的 分离、培养并鉴定新西兰兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),观察BMSCs经腺病毒重组人骨形态发生蛋白-9(AdBMP-9)诱导后的成骨分化及其在明胶海绵上的生长.方法 采用全骨髓培养
【机 构】
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400016,重庆医科大学附属第一医院骨科
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目的 分离、培养并鉴定新西兰兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),观察BMSCs经腺病毒重组人骨形态发生蛋白-9(AdBMP-9)诱导后的成骨分化及其在明胶海绵上的生长.方法 采用全骨髓培养分离提取兔BMSCs,噻唑蓝(MTT)检测第2、3、4、5代细胞的增殖.流式细胞仪检测兔BMSCs表面抗原CD44和CD34.利用AdBMP-9转染第3代BMSCs,分别于诱导后7、14 d行碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红S染色和免疫荧光染色检测早期和晚期成骨标志物碱性磷酸酶、钙结节及骨钙素(OC)的表达.同时在14 d行油红O染色观察其成脂分化能力,荧光显微镜下观察BMSCs与明胶海绵复合生长.结果 成功分离提取兔BMSCs,经传代,细胞由长梭形变为短梭形,第3代形态、大小趋于稳定.MTT检测发现第2、3、4、5代细胞均呈对数生长,生长曲线近似“S”型,第2代细胞生长最慢,第4代生长最快(P＜0.05).流式细胞仪检测显示,CD44和CD34的阳性率分别为94.38％和2.63％.AdBMP-9诱导后,可检测到早期和晚期成骨标志物及脂滴的生成,转染后的BMSCs可较好地与明胶海绵复合生长.结论 采用全骨髓培养法可分离得到较纯的兔BMSCs,在AdBMP-9诱导下,其可向成骨、成脂分化,且能较好地与明胶海绵复合生长.
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