【摘 要】
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在革兰氏阳性菌中,分解代谢控制蛋白(CcpA)是一种参与碳代谢和氮代谢的多效调控蛋白.利用同源重组技术,以德式乳杆菌保加利亚亚种为研究对象,构建CcpA基因敲除突变株.首先以
【机 构】
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东北农业大学食品学院乳品科学教育部重点实验室 哈尔滨150030
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在革兰氏阳性菌中,分解代谢控制蛋白(CcpA)是一种参与碳代谢和氮代谢的多效调控蛋白.利用同源重组技术,以德式乳杆菌保加利亚亚种为研究对象,构建CcpA基因敲除突变株.首先以德式乳杆菌保加利亚亚种ATCC11842基因组DNA和质粒pBR322为模板,扩增CcpA基因和四环素抗性基因(Tet),然后分别将CcpA基因和Tet基因连接到载体pBackZero-T Vector上,再对中间载体pBackZero-CcpA和pBackZero-Tet进行双酶切,回收纯化双酶切后的目的片段并连接获得CcpA基因敲除的重组载体pCT.通过同源重组筛选CcpA基因敲除突变株,菌落PCR和测序鉴定结果均显示CcpA基因敲除突变株构建成功,这为阐明该调控蛋白在德式乳杆菌保加利亚亚种代谢过程中的作用奠定了基础.
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