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目的构建含有表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variant Ⅲ,EGFRvⅢ)的重组质粒,建立实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术测定EGFRvⅢ的标准曲线,以定量检测喉鳞癌组织中EGFRvⅢ的表达水平。方法以重叠延伸PCR法构建含EGFR第1外显子及第8至部分第9外显子的融合序列。再以融合序列为模板,以高特异性的引物扩增EGFRvⅢ的目的片段,构建含有EGFRvⅢ的重组质粒,进行测序鉴定。将此质粒作为标准品进行梯度稀释,以TaqMan探针实时荧光定量PCR进行检测,建立标准曲线。并以此技术对32例喉鳞癌组织中EGFRvⅢ mRNA表达水平进行测定。结果经测序鉴定,含EGFRvⅢ的重组质粒标准品构建成功,以不同稀释水平的标准品质粒进行荧光定量PCR扩增所得的标准曲线,可用于EGFRvⅢ定量分析。32例喉鳞癌组织中共有5例检测到EGFRvⅢ的表达,阳性率为15.6%。除1例癌旁组织中存在极少量的EGFRvⅢ表达外,EGFRvⅢ均在肿瘤组织中表达。结论用TaqMan探针实时荧光定量PCR技术定量研究EGFRvⅢ的方法已构建成功,在喉癌组织中的成功运用已证明该方法切实可行,并且较为准确可靠。EGFRvⅢ在喉癌组织中有表达,但是阳性率及含量不高,是否能成为喉癌生物治疗的特异性攻击靶点尚待进一步探索。