【摘 要】
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为研究新合成的靶向抗肿瘤肽RGD-T-La(S)、RGD-T-La(FS)对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖及其黑色素合成的影响,本研究将T-La (S)、T-La (FS)与RGD (精氨酸-谷氨酸-天冬氨酸)小分子
【机 构】
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天津农学院动物科学与动物医学学院;
【基金项目】
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天津市应用基础与前沿技术研究计划一般项目(14JCYBJC30000、18JCYBJC30100);天津市高校“中青年骨干创新人才”培养计划(J01009030721);国家自然科学基金青年基金(31702223);天津市“131”创新型人才培养计划
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为研究新合成的靶向抗肿瘤肽RGD-T-La(S)、RGD-T-La(FS)对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖及其黑色素合成的影响,本研究将T-La (S)、T-La (FS)与RGD (精氨酸-谷氨酸-天冬氨酸)小分子蛋白质偶联,合成新的靶向抗肿瘤肽RGD-T-La (S)、RGD-T-La (FS)。通过CCK8法检测多肽对B16细胞增殖的影响;微量酶标法检测多肽作用于B16细胞后乳酸脱氢酶(LDH)含量变化;透射电镜观察多肽作用B16细胞后的超微结构;流式细胞仪检测多肽对B16细胞周期的影响;NaOH裂解法和L-Dopa氧化法分析多肽对黑色素合成含量和酪氨酸酶活性的影响;荧光定量PCR (q-PCR)法分析多肽对黑色素合成关键因子酪氨酸酶(TYR)和小眼相关转录因子(MITF)基因转录水平的影响。结果显示,RGD-T-La(S)、RGD-T-La (FS)在10μg/mL时能够显著抑制B16细胞的增殖,且呈现时间浓度依赖性;RGD嵌合体肽在20μg/mL时能够显著增加B16细胞中LDH含量,且呈现浓度依赖性;透射电镜结果显示RGD嵌合体肽作用B16后,细胞出现自噬体及线粒体自噬现象;同时RGD嵌合体肽对酪氨酸酶活性和细胞黑色素蛋白的生成具有明显的抑制作用,显著降低TYR和MITF基因的转录水平。上述结果表明,RGD嵌合体肽在体外具有诱导细胞凋亡,抑制B16细胞增殖的作用,能够促进抗肿瘤肽T-La (FS)对肿瘤细胞的靶向杀伤作用。本实验为研究RGD嵌合体肽RGD-T-La (S)和RGD-T-La (FS)靶向抗肿瘤的作用机制以及为临床相关抗肿瘤药物的研发提供科学依据。
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