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【关键词】注射用吗利福肽;脑卒中;缺血性;临床试验
【中图分类号】R927 【文献标识码】A 【文章编号】1674-0688（2021）08-0045-03
1 概述
脑卒中（俗称脑中风）是仅次于恶性肿瘤的死亡原因，全球每年大约有2 200万人发生脑卒中，主要包括三大类，即缺血性（87%）、出血性（10%）、蛛网膜下腔出血（3%）[1]。当前，指南推荐临床对于缺血性脑血管疾病的临床治疗主要是采用动/静脉溶栓、抗凝、扩容、扩血管及血管内干预等方面的治疗途径，然而目前尚未发现一种有效治疗急性缺血性脑卒中的神经保护类药物[2]。
临床研究证实，脑组织缺血后可引起急性和慢性的炎症反应，局部脑缺血后，许多致炎介质释放或激活，如炎性细胞因子（特别是TNF-α、IL-1）、趋化因子及内皮细胞-白细胞黏附分子水平上调，使白细胞浸润到脑实质，并激活脑小胶质细胞和星形胶质细胞，脑缺血再灌注引起的炎症反应能够引起脑微循环障碍和邻近脑组织的损伤。炎症反应的程度、脑组织损伤的程度跟脑卒中病人的长期预后有较大关联，抗炎治疗已成为脑缺血防治的一个重要研究方向，炎症诱导的损伤机制在防治缺血性脑卒中疾病时对挽救缺血性半暗带、保护血脑屏障起重要作用，可扩大治疗时间窗，有着巨大的临床价值。
吗利福肽（Monocyte Locomotion Inhibitory Factor，MLIF）作为一种治疗缺血性脑卒中的新药，是八加一药业股份有限公司研究团队历经十数载的基础研究和临床前研究的重大研究成果。注射用吗利福肽的研究先后获得国家科技重大专项“防治缺血性脑卒中活性肽候选新药研究”（合同号2009ZX0913-120，已结题）、“防治缺血性脑卒中活性肽临床前研究”（合同号2013ZX09102011，已结题）和广东省科技重大专项“防治缺血性脑卒中活性肽临床前研究”（合同号2013A022100006，已结题）的支持。获得了包括“多肽小分子在制备防治缺血性脑血管病药物中的应用”[3]在内的6件授权发明专利及“Method for Treating Myocardial Ischemia”（US8343921B2）等2件PCT授权专利。研究论文在国际著名杂志“STROKE”发表。
临床前研究表明：注射用吗利福肽是人工合成的小分子多肽，与热稳定的具有抗炎活性寡肽[从溶组织阿米巴（Entamoeba Histolytica）培养的上清液中分离得到]具有同样的氨基酸序列，有较强的抗炎活性，能明显逆转慢性脑缺血所致的神经细胞的损伤，对急性脑缺血有较好的保护作用，机制较新，靶点明确，为生物内源性物质，安全性好，有望成为治疗缺血性脑卒中的新药。此外，注射用吗利福肽可以通过血脑屏障，对脑血管病具有良好的预防与治疗作用[4]。
2 临床试验拟解决的关键问题
2015年2月由八加一药业股份有限公司主导，下属全资子公司广东八加一医药有限公司研发的原料药吗利福肽和注射用吗利福肽获得1.1类新药药物临床试验批件（批件号分别为2015L00348、2015L00349），重点开展3期临床试验。目前，注射用吗利福肽的临床试验工作已全面启动，其中Ⅰ期临床试验已在北京协和医院和江苏省人民医院完成，试验结果表明：注射用吗利福肽作用于人体安全，耐受性好。
2.1 特异性生物标志物判定方法
缺血性脑卒中神經功能保护类新药（吗利福肽属于其一）的临床终点是困扰此类药物临床试验疗效判断的共性难题，目前尚无明确的客观的疗效指标和检测手段对其进行判断，找到临床终点判断的代表物质和检测方法事关临床试验的成败。
本课题组经研究发现，注射用吗利福肽治疗缺血性脑卒中特异性生物标志物（BIO-MARK），特征性炎症因子水平的变化与临床预后密切相关，Ⅱ、Ⅲ期临床试验将通过检测受试者体内的特异性生物标志物水平评价注射用吗利福肽的疗效，该方法专属性强，检测灵敏度高，可为抗炎机理的缺血性脑卒中神经功能保护类新药临床研究提供一个全新的检测方法。
将研究发现的特异性生物标志物判定作为注射用吗利福肽应用于缺血性脑卒中患者的临床终点判断。
2.2 客观、有效的评价方法
根据CFDA（国家食品药品监督管理总局）最新颁布的《急性缺血性脑卒中治疗药物临床试验技术指导原则》，缺血性脑卒中严重程度通常采用NIHSS（美国国立卫生研究院脑卒中量表）评分界定，NIHSS评分过程完全依靠医务人员主观判断，数据准确性差，对脑卒中受试药物的评价结果人为因素干扰较大。
注射用吗利福肽Ⅱ、Ⅲ期临床试验采用步态分析系统对受试者进行评价，在整个评价过程通过计算机采集一系列数据完成，数据准确可靠，将试验过程人为因素导致结果偏差降到最低。
注射用吗利福肽Ⅱ、Ⅲ期临床试验采用磁共振成像等医学影像学手段，全程监测临床试验受试者入组、治疗、出组等阶段脑组织炎症浸润和水肿变化情况，检测方法直观、严谨，为临床试验药物的疗效判断提供科学依据。
注射用吗利福肽Ⅱ、Ⅲ期临床试验采用神经内科与急诊科联动的工作机制，将受试者筛查前移至急诊科，实现受试者快速诊断、快速入组、尽快给药，确保受试者在有效的治疗时间窗用上试验药物，对注射用吗利福肽的临床试验结果评价更加客观、准确。
3 项目技术路线
3.1 技术路线
3.1.1 Ⅱ期临床试验
在Ⅰ期临床试验结果的基础上分两个阶段进行，第一阶段为Ⅱa期临床试验，以小样本多次给药、剂量递增的方式开展试验，研究给药方式、剂量及时间对治疗效果的影响，其间开展多次给药药代动力学研究及药物相互作用研究;第二阶段为Ⅱb期临床试验，以Ⅱa期临床试验研究结果为基础，选择2或3个给药方案进行中样本的临床试验研究，初步确定给药方案。 3.1.2 动物生殖毒性试验
完成注射用吗利福肽的大鼠Ⅲ段和家兔Ⅱ段生殖毒性试验，评价其对哺乳动物生殖功能和发育过程的影响。
3.1.3 Ⅲ期临床试验
在Ⅱ期临床试验结果的基础上，根据初步确定的给药方案进行验证性试验研究，评价药物的总体疗效和安全性。
3.1.4 新药申请
汇总各期临床试验结果，形成本项目的临床试验报告，申请新药注册。
3.1.5 项目产业化
按GMP要求建设原料药合成生产线及冻干粉针制剂生产线，开展中试放大试验，完成工艺优化、质量标准验证、生产现场核查和药品生产GMP符合性检查，获得新药证书及药品生产批文，实现产品上市销售。
3.2 项目技术路线图
项目技术路线图如图1所示。
4 项目关键技术
4.1 采用特异性生物标志物判断注射用吗利福肽临床终点的检测技术
通过检测脑卒中受试者体内的特异性生物标志物水平评价注射用吗利福肽的臨床试验终点。
4.2 对注射用吗利福肽受试者疗效采用客观、有效的观察手段和评价方法
采用步态分析系统对受试者进行评价;采用磁共振成像等医学影像学手段，全程监测临床试验受试者;采用神经内科与急诊科联动的工作机制，实现受试者快速诊断、快速入组、尽快给药，确保受试者在有效的治疗时间窗用上试验药物;通过上述一系列措施，使注射用吗利福肽对缺血性脑卒中的疗效结果真实可靠，减少人为因素导致结果偏差。
采用特异性生物标志物判断注射用吗利福肽临床终点的检测技术及对注射用吗利福肽受试者疗效采用客观、有效的观察手段和评价方法，进一步评价注射用吗利福肽对治疗缺血性脑卒中的有效性和安全性，为注射用吗利福肽申请新药证书提供充分的依据。
4.3 项目产业化
对原料药的固相合成法的反应条件（包括温度、纯化试剂与中间产品的比例等）进行优化，形成一套既适合工业化生产又高效节能的生产工艺，在新建生产线连续进行3批生产，验证工艺的可行性。通过对原料药工艺优化，实现原料药生产成本降低20%、成品收率提高10%、溶媒用量减少30%以上的目标。
5 项目技术创新点
本项目的技术创新点如下。
5.1 检测方法
通过检测注射用吗利福肽在体内的代谢产物，发现脑卒中抗炎机理药物的特异性生物标志物（BIO-MARK），通过检测其特异性生物标志物判断临床终点，为抗炎机理的缺血性脑卒中神经功能保护类新药的临床研究提供最新检测标准。该检验方法专属性强，可解决缺血性脑卒中神经功能保护类新药的临床终点判断难题。
5.2 评价方法
注射用吗利福肽的Ⅱ、Ⅲ期临床试验引入步态评分系统，可客观评价受试者用药后的临床症状和行为学评分的改善情况，与传统的NIHSS（美国国立卫生研究院脑卒中量表）评分系统相比，能有效地减少评分偏差，提高试验药物疗效评价的准确性;采用磁共振成像等医学影像学手段，监测临床试验受试者入组、治疗、出组等阶段脑组织炎症浸润和水肿变化情况，检测方法直观、严谨，为试验药物的疗效判断提供科学依据;试验方案确立神经内科与急诊科联合实施的工作机制，实现快速诊断、快速入组、尽快给药，确保受试者在有效的治疗时间窗用上试验药物。
6 结语
本项目完成后将作为国家1.1类化药新药上市，获得国家新药证书及2项国家药品注册标准，建成广西第一条肽类原料药合成生产线。
临床试验过程中通过检测特异性生物标志物判断药物的临床终点，将为国内治疗脑卒中的神经保护类新药临床试验提供一种全新的检测方法。
我国缺血性脑卒中发病率呈上升趋势，据统计我国每年有750万的脑卒中病例（其中缺血性脑卒中患者约占80%）。注射用吗利福肽作为治疗缺血性脑卒中新药，将给国内广大脑卒中患者提供一种全新的安全有效的治疗药物，解决临床急需。根据国家有关规定，原创新药纳入国家医保目录，减轻患者的经济负担，同时将为世界治疗缺血性脑卒中药物树立典范，社会意义重大。
参 考 文 献
[1]申青仙，张赛，涂悦.急性缺血性脑卒中的临床治疗研究进展[J].中国医药，2020，15（4）：633-636.
[2]贾喆.小剂量阿替普酶在静脉溶栓治疗急性缺血性脑卒中的神经保护作用[J].蚌埠医学院学报，2019，44（7）：920-922，926.
[3]杨鹏远，芮耀诚，章越凡.多肽小分子在制备防治缺血性脑血管病药物中的应用[P].中国专利：2008102006
10.0，2009-02-11.
[4]程浩，芮耀诚，章越凡，等.生物活性肽-单核细胞迁移抑制因子研究进展[J].药学实践杂志，2015，33（1）：17-19，27.
【中图分类号】R927 【文献标识码】A 【文章编号】1674-0688（2021）08-0045-03
1 概述
脑卒中（俗称脑中风）是仅次于恶性肿瘤的死亡原因，全球每年大约有2 200万人发生脑卒中，主要包括三大类，即缺血性（87%）、出血性（10%）、蛛网膜下腔出血（3%）[1]。当前，指南推荐临床对于缺血性脑血管疾病的临床治疗主要是采用动/静脉溶栓、抗凝、扩容、扩血管及血管内干预等方面的治疗途径，然而目前尚未发现一种有效治疗急性缺血性脑卒中的神经保护类药物[2]。
临床研究证实，脑组织缺血后可引起急性和慢性的炎症反应，局部脑缺血后，许多致炎介质释放或激活，如炎性细胞因子（特别是TNF-α、IL-1）、趋化因子及内皮细胞-白细胞黏附分子水平上调，使白细胞浸润到脑实质，并激活脑小胶质细胞和星形胶质细胞，脑缺血再灌注引起的炎症反应能够引起脑微循环障碍和邻近脑组织的损伤。炎症反应的程度、脑组织损伤的程度跟脑卒中病人的长期预后有较大关联，抗炎治疗已成为脑缺血防治的一个重要研究方向，炎症诱导的损伤机制在防治缺血性脑卒中疾病时对挽救缺血性半暗带、保护血脑屏障起重要作用，可扩大治疗时间窗，有着巨大的临床价值。
吗利福肽（Monocyte Locomotion Inhibitory Factor，MLIF）作为一种治疗缺血性脑卒中的新药，是八加一药业股份有限公司研究团队历经十数载的基础研究和临床前研究的重大研究成果。注射用吗利福肽的研究先后获得国家科技重大专项“防治缺血性脑卒中活性肽候选新药研究”（合同号2009ZX0913-120，已结题）、“防治缺血性脑卒中活性肽临床前研究”（合同号2013ZX09102011，已结题）和广东省科技重大专项“防治缺血性脑卒中活性肽临床前研究”（合同号2013A022100006，已结题）的支持。获得了包括“多肽小分子在制备防治缺血性脑血管病药物中的应用”[3]在内的6件授权发明专利及“Method for Treating Myocardial Ischemia”（US8343921B2）等2件PCT授权专利。研究论文在国际著名杂志“STROKE”发表。
临床前研究表明：注射用吗利福肽是人工合成的小分子多肽，与热稳定的具有抗炎活性寡肽[从溶组织阿米巴（Entamoeba Histolytica）培养的上清液中分离得到]具有同样的氨基酸序列，有较强的抗炎活性，能明显逆转慢性脑缺血所致的神经细胞的损伤，对急性脑缺血有较好的保护作用，机制较新，靶点明确，为生物内源性物质，安全性好，有望成为治疗缺血性脑卒中的新药。此外，注射用吗利福肽可以通过血脑屏障，对脑血管病具有良好的预防与治疗作用[4]。
2 临床试验拟解决的关键问题
2015年2月由八加一药业股份有限公司主导，下属全资子公司广东八加一医药有限公司研发的原料药吗利福肽和注射用吗利福肽获得1.1类新药药物临床试验批件（批件号分别为2015L00348、2015L00349），重点开展3期临床试验。目前，注射用吗利福肽的临床试验工作已全面启动，其中Ⅰ期临床试验已在北京协和医院和江苏省人民医院完成，试验结果表明：注射用吗利福肽作用于人体安全，耐受性好。
2.1 特异性生物标志物判定方法
缺血性脑卒中神經功能保护类新药（吗利福肽属于其一）的临床终点是困扰此类药物临床试验疗效判断的共性难题，目前尚无明确的客观的疗效指标和检测手段对其进行判断，找到临床终点判断的代表物质和检测方法事关临床试验的成败。
本课题组经研究发现，注射用吗利福肽治疗缺血性脑卒中特异性生物标志物（BIO-MARK），特征性炎症因子水平的变化与临床预后密切相关，Ⅱ、Ⅲ期临床试验将通过检测受试者体内的特异性生物标志物水平评价注射用吗利福肽的疗效，该方法专属性强，检测灵敏度高，可为抗炎机理的缺血性脑卒中神经功能保护类新药临床研究提供一个全新的检测方法。
将研究发现的特异性生物标志物判定作为注射用吗利福肽应用于缺血性脑卒中患者的临床终点判断。
2.2 客观、有效的评价方法
根据CFDA（国家食品药品监督管理总局）最新颁布的《急性缺血性脑卒中治疗药物临床试验技术指导原则》，缺血性脑卒中严重程度通常采用NIHSS（美国国立卫生研究院脑卒中量表）评分界定，NIHSS评分过程完全依靠医务人员主观判断，数据准确性差，对脑卒中受试药物的评价结果人为因素干扰较大。
注射用吗利福肽Ⅱ、Ⅲ期临床试验采用步态分析系统对受试者进行评价，在整个评价过程通过计算机采集一系列数据完成，数据准确可靠，将试验过程人为因素导致结果偏差降到最低。
注射用吗利福肽Ⅱ、Ⅲ期临床试验采用磁共振成像等医学影像学手段，全程监测临床试验受试者入组、治疗、出组等阶段脑组织炎症浸润和水肿变化情况，检测方法直观、严谨，为临床试验药物的疗效判断提供科学依据。
注射用吗利福肽Ⅱ、Ⅲ期临床试验采用神经内科与急诊科联动的工作机制，将受试者筛查前移至急诊科，实现受试者快速诊断、快速入组、尽快给药，确保受试者在有效的治疗时间窗用上试验药物，对注射用吗利福肽的临床试验结果评价更加客观、准确。
3 项目技术路线
3.1 技术路线
3.1.1 Ⅱ期临床试验
在Ⅰ期临床试验结果的基础上分两个阶段进行，第一阶段为Ⅱa期临床试验，以小样本多次给药、剂量递增的方式开展试验，研究给药方式、剂量及时间对治疗效果的影响，其间开展多次给药药代动力学研究及药物相互作用研究;第二阶段为Ⅱb期临床试验，以Ⅱa期临床试验研究结果为基础，选择2或3个给药方案进行中样本的临床试验研究，初步确定给药方案。 3.1.2 动物生殖毒性试验
完成注射用吗利福肽的大鼠Ⅲ段和家兔Ⅱ段生殖毒性试验，评价其对哺乳动物生殖功能和发育过程的影响。
3.1.3 Ⅲ期临床试验
在Ⅱ期临床试验结果的基础上，根据初步确定的给药方案进行验证性试验研究，评价药物的总体疗效和安全性。
3.1.4 新药申请
汇总各期临床试验结果，形成本项目的临床试验报告，申请新药注册。
3.1.5 项目产业化
按GMP要求建设原料药合成生产线及冻干粉针制剂生产线，开展中试放大试验，完成工艺优化、质量标准验证、生产现场核查和药品生产GMP符合性检查，获得新药证书及药品生产批文，实现产品上市销售。
3.2 项目技术路线图
项目技术路线图如图1所示。
4 项目关键技术
4.1 采用特异性生物标志物判断注射用吗利福肽临床终点的检测技术
通过检测脑卒中受试者体内的特异性生物标志物水平评价注射用吗利福肽的臨床试验终点。
4.2 对注射用吗利福肽受试者疗效采用客观、有效的观察手段和评价方法
采用步态分析系统对受试者进行评价;采用磁共振成像等医学影像学手段，全程监测临床试验受试者;采用神经内科与急诊科联动的工作机制，实现受试者快速诊断、快速入组、尽快给药，确保受试者在有效的治疗时间窗用上试验药物;通过上述一系列措施，使注射用吗利福肽对缺血性脑卒中的疗效结果真实可靠，减少人为因素导致结果偏差。
采用特异性生物标志物判断注射用吗利福肽临床终点的检测技术及对注射用吗利福肽受试者疗效采用客观、有效的观察手段和评价方法，进一步评价注射用吗利福肽对治疗缺血性脑卒中的有效性和安全性，为注射用吗利福肽申请新药证书提供充分的依据。
4.3 项目产业化
对原料药的固相合成法的反应条件（包括温度、纯化试剂与中间产品的比例等）进行优化，形成一套既适合工业化生产又高效节能的生产工艺，在新建生产线连续进行3批生产，验证工艺的可行性。通过对原料药工艺优化，实现原料药生产成本降低20%、成品收率提高10%、溶媒用量减少30%以上的目标。
5 项目技术创新点
本项目的技术创新点如下。
5.1 检测方法
通过检测注射用吗利福肽在体内的代谢产物，发现脑卒中抗炎机理药物的特异性生物标志物（BIO-MARK），通过检测其特异性生物标志物判断临床终点，为抗炎机理的缺血性脑卒中神经功能保护类新药的临床研究提供最新检测标准。该检验方法专属性强，可解决缺血性脑卒中神经功能保护类新药的临床终点判断难题。
5.2 评价方法
注射用吗利福肽的Ⅱ、Ⅲ期临床试验引入步态评分系统，可客观评价受试者用药后的临床症状和行为学评分的改善情况，与传统的NIHSS（美国国立卫生研究院脑卒中量表）评分系统相比，能有效地减少评分偏差，提高试验药物疗效评价的准确性;采用磁共振成像等医学影像学手段，监测临床试验受试者入组、治疗、出组等阶段脑组织炎症浸润和水肿变化情况，检测方法直观、严谨，为试验药物的疗效判断提供科学依据;试验方案确立神经内科与急诊科联合实施的工作机制，实现快速诊断、快速入组、尽快给药，确保受试者在有效的治疗时间窗用上试验药物。
6 结语
本项目完成后将作为国家1.1类化药新药上市，获得国家新药证书及2项国家药品注册标准，建成广西第一条肽类原料药合成生产线。
临床试验过程中通过检测特异性生物标志物判断药物的临床终点，将为国内治疗脑卒中的神经保护类新药临床试验提供一种全新的检测方法。
我国缺血性脑卒中发病率呈上升趋势，据统计我国每年有750万的脑卒中病例（其中缺血性脑卒中患者约占80%）。注射用吗利福肽作为治疗缺血性脑卒中新药，将给国内广大脑卒中患者提供一种全新的安全有效的治疗药物，解决临床急需。根据国家有关规定，原创新药纳入国家医保目录，减轻患者的经济负担，同时将为世界治疗缺血性脑卒中药物树立典范，社会意义重大。
参 考 文 献
[1]申青仙，张赛，涂悦.急性缺血性脑卒中的临床治疗研究进展[J].中国医药，2020，15（4）：633-636.
[2]贾喆.小剂量阿替普酶在静脉溶栓治疗急性缺血性脑卒中的神经保护作用[J].蚌埠医学院学报，2019，44（7）：920-922，926.
[3]杨鹏远，芮耀诚，章越凡.多肽小分子在制备防治缺血性脑血管病药物中的应用[P].中国专利：2008102006
10.0，2009-02-11.
[4]程浩，芮耀诚，章越凡，等.生物活性肽-单核细胞迁移抑制因子研究进展[J].药学实践杂志，2015，33（1）：17-19，27.