【摘 要】
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为开发抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)卵黄抗体制剂,应用RT-PCR技术从患猪流行性腹泻(PED)仔猪肠组织中扩增出523 bp的基因片段,构建了重组表达质粒pET32a-S1-523,转化至感受态细
【机 构】
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佛山科学技术学院生命科学与工程学院动物医学系
【基金项目】
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国家自然科学基金青年科学基金项目(31502047);广东省科技计划项目(2015B02023006);广东省现代农业科技创新联盟建设(2016LM1140);广东省教育厅预防兽医学重点实验室项目(2014KTSPT037);广东省畜禽疾病免疫防控工程技术研究中心(粤科函产学研字[2017]1649号)
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为开发抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)卵黄抗体制剂,应用RT-PCR技术从患猪流行性腹泻(PED)仔猪肠组织中扩增出523 bp的基因片段,构建了重组表达质粒pET32a-S1-523,转化至感受态细胞BL21 (DE3)中,经0.4 mmoL/L IPTG诱导表达7 h后成功表达出32.8 kDa大小的可溶性重组蛋白。该重组蛋白经Ni-NTA蛋白纯化柱纯化后,进行SDS-PAGE鉴定。Western Blot检测结果显示特异性良好。以重组蛋白作为抗原免疫50只初产蛋鸡,收集高免卵黄液,并采用喷雾干燥技术和冷冻干燥技术研制卵黄抗体粉和卵黄抗体冻干粉,利用间接ELISA方法检测其抗体效价。应用高效价高剂量的卵黄抗体制剂对规模化猪场中患病仔猪进行治疗试验,结果显示,卵黄抗体粉组的治愈率为74.67%,卵黄抗体液组的治愈率为78.26%,卵黄抗体冻干粉组的治愈率为75.93%。表明卵黄抗体制剂对患PED仔猪具有一定的治疗效果。
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