【摘 要】
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目的探讨miR-125b-5p对心衰心肌细胞凋亡的影响及其潜在机制。方法分离培养大鼠原代心肌细胞,采用0.8%戊巴比妥钠诱导心肌细胞构建心衰模型。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹实验检测心衰心肌细胞中miR-125b-5p和钙通道电压依赖性β1蛋白(CACNB1)表达。下调miR-125b-5p或过表达CACNB1,流式细胞仪检测细胞凋亡。Targetscan在线预测、双荧光素酶报告
【机 构】
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聊城市第二人民医院急救中心 252600,聊城市第二人民医院急诊科 252600,山东大学齐鲁医院中毒与职业病科,济南 250012,
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目的探讨miR-125b-5p对心衰心肌细胞凋亡的影响及其潜在机制。
方法分离培养大鼠原代心肌细胞,采用0.8%戊巴比妥钠诱导心肌细胞构建心衰模型。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹实验检测心衰心肌细胞中miR-125b-5p和钙通道电压依赖性β1蛋白(CACNB1)表达。下调miR-125b-5p或过表达CACNB1,流式细胞仪检测细胞凋亡。Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因实验和免疫印迹验证miR-125b-5p和CACNB1的靶向关系。将miR-125b-5p inhibitors和CACNB1 siRNA共转染至心衰心肌细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡。
结果与对照组相比,心衰心肌细胞中miR-125b-5p表达上调(3.11±0.12比1.04±0.09,P<0.05),而CACNB1的mRNA和蛋白表达显著下调(0.76±0.07比1.96±0.11、0.53±0.05比0.94±0.06,均P<0.05)。下调miR-125b-5p或过表达CACNB1,心衰心肌细胞凋亡率显著降低[(10.11±0.92)%比(19.76±1.07)%、(8.11±0.67)%比(21.76±1.22)%,均P<0.05]。Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因实验和免疫印迹实验结果表明,miR-125b-5p可靶向调控CACNB1蛋白表达。敲减CACNB1可逆转miR-125b-5p对心衰心肌细胞凋亡的抑制作用。
结论miR-125b-5p可通过靶向调节CACNB1表达,抑制心衰大鼠心肌细胞凋亡。
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