【摘 要】
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目的建立新的白介素-6受体(interleukin-6 receptor,IL-6R)小分子拮抗剂高通量筛选模型。方法PCR扩增IL-6R胞外区基因,将其克隆至真核表达载体构建重组质粒p ABHis-IL6R,瞬时
【机 构】
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中国医学科学院药物研究所,军事医学科学院生物工程研究所,河南大学药学院,
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目的建立新的白介素-6受体(interleukin-6 receptor,IL-6R)小分子拮抗剂高通量筛选模型。方法PCR扩增IL-6R胞外区基因,将其克隆至真核表达载体构建重组质粒p ABHis-IL6R,瞬时转染HEK293T细胞进行分泌表达。利用Western印迹实验、受体配体结合实验对表达产物进行活性验证。利用二者的相互作用以及Fc片段与酶标二抗结合的特性建立基于ELISA法的IL-6R拮抗剂筛选模型,并用Z’-因子检测与已知拮抗剂ab47215对该模型的稳定性与可靠性进行评估。结果成功构建了真核表达载体p ABHis-IL6R,并对IL-6R进行了分泌表达。所表达的IL-6R能够被特异性抗体识别,能够与其配体rh IL-6特异性地结合,并表现出良好的量效关系。经测算得出,该模型的Z’-因子为0.53,满足高通量筛选的要求。ab47215能够剂量依赖性地阻断IL-6R与其配体的结合,其IC50=(0.55±0.11)μg/ml。结论建立了一种新颖而简便的IL-6R拮抗剂筛选模型,为寻找高效、低毒的小分子拮抗剂奠定了基础。
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