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研究了犊牛血清、饲养层、培养液、添加物和消化液对牛和小鼠类胚胎干细胞克隆效率的影响.结果表明,在24 h内使小鼠胚胎贴壁率达86%以上的犊牛血清可用于小鼠和牛胚胎干细胞的分离和克隆;在ES细胞培养液中,犊牛血清体积分数以15%~20%为宜,在DMEM(L)培养液中添加0.1 μmol/L Na2SeO3+0.1 mmol/L β-巯基乙醇+10 ng/mL IGF+1 000 ng/mL LIF,能显著提高牛ES细胞分离与克隆效率;低糖DMEM比TCM199和高糖DMEM更适宜于牛ES细胞的分离.优秀胚胎